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帕金森模型科研實驗技術服務介紹
閱讀：90 發(fā)布時間：2024-9-24應用簡介
帕金森氏?。≒arkinson’s Disease,，PD）是一種會影響運動的進行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，老年人多見,，平均發(fā)病年齡在60歲左右,，癥狀會逐漸出現(xiàn)，有時始于不易察覺的單手震顫,，還常導致僵硬或運動緩慢,。除此之外帕金森患者也表現(xiàn)出了感覺障礙和認知功能障礙等非運動癥狀。
其主要病理變化是黑質(zhì)致密部（SNpc）中多巴胺（DA）能神經(jīng)元進行性丟失并伴有紋狀體多巴胺水平的下降,、α-突觸核蛋白（α-synuclein, α-Syn））為主要成分的路易小體的形成,，致使得腦部指揮肌肉活動的能力受到不同程度的限制，大大阻礙了患者的活動能力,。
導致這一病理變化的確切因素尚不清楚，遺傳因素,、環(huán)境因素、年齡老化,、氧化應激等均可能參與PD多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡過程。
PD的發(fā)病機制和各作用靶點之間的聯(lián)系仍是現(xiàn)今研究的熱點,，因此在基礎研究中模型的制備對PD的研究具有舉足輕重的作用?？偟膩碚f，PD模型主要分為兩類,，一是誘發(fā)性動物模型,，二是基因修飾動物模型。
造模方法
在注射當天配制好新鮮的MPTP溶液,，然后腹腔或皮下注射MPTP,。試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配。
根據(jù)實驗要求和目的,，可分為快速模型和慢速模型。
快速模型可分為單次注射和多次注射,。單次注射的劑為30mg/kg,，該模型損傷輕，易恢復,；多次注射的劑量為20mg/kg，每隔2h注射1次,，共3-4次,，該模型損傷快且嚴重，DA神經(jīng)元的損傷到死亡可以在3d內(nèi)完成,。
慢速模型需多次注射,，每天1次,，單次注射的劑量為20mg/kg,連續(xù)注射5-7d。該模型的成活率較高,，實驗周期較長。
模型驗證：
（1）造模后進行行為學觀察參照Francois的實驗方法(包括行動遲緩實驗,、抓握實驗和尾強直實驗記錄強直癥狀的變化,、震顫實驗)記錄帕金森氏病的三大癥狀,，觀察到小鼠出現(xiàn)尾巴僵硬豎直,，身體出現(xiàn)非自主性震顫，自發(fā)活動減少,，表明帕金森模型構(gòu)建成功,。
（2）離體腦組織中黑質(zhì)、紋狀體免疫組化染色
MPTP在注射后,，7d對小鼠黑質(zhì)致密部（SNpc）和紋狀體（Striatum）免疫染色,。結(jié)果所示，在進行造模后,，小鼠紋狀體（Striatum）末端和黑質(zhì)致密部（SNpc）的酪氨酸羥化酶(TH)陽性細胞體和纖維所形成的的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)密度顯著降低,，且TH陽性細胞數(shù)量顯著降低，TH陽性纖維密度顯著降低,。
MPTP誘導的小鼠帕金森模型由于造模技術相對簡單（只需要腹腔注射）,、對多巴胺神經(jīng)元的殺傷效果穩(wěn)定也得到了廣泛的認可。不少關于多巴胺能神經(jīng)元死亡機制方面的研究都采用MPTP誘導的小鼠帕金森模型作為實驗范式,。
Tips：
（1）MPTP誘導的小鼠帕金森模型對動物的性別、體重,、年齡甚至品系來源均非常敏感,，因此在挑選動物的時候要十分小心。
C57BL小鼠對MPTP最為敏感，而CF-W小鼠,、FVB／N小鼠和Balb/C小鼠對MPTP的敏感性較C57BL小鼠稍差,，CF-1和CD-1對MPTP的敏感性最差。目前較常用的小鼠為C57BL/6小鼠,。
老齡鼠較青年鼠對MPTP更為敏感。
（2）在注射前務必適應性飼養(yǎng)1周左右,。因為長距離運輸會改變腦的狀態(tài),，因此需要5-7天時間來使動物恢復并適應環(huán)境。
（3）未被代謝的MPTP將會隨著動物的排泄物被釋放到墊料中,，因此在注射之后小鼠需要進行嚴格的隔離飼養(yǎng)。其使用的墊料,、飲水必須經(jīng)過無害化處理，然后作為醫(yī)療垃圾廢棄,。
（4）MPTPyou劇毒，在稱量溶解和注射時一定做好個人的防護工作,。
