動(dòng)物疫病血凝分析儀執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

DY-7000動(dòng)物疫病血凝分析儀廣泛適用于動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,、動(dòng)物防疫監(jiān)督所,、獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、獸醫(yī)研究所,、大學(xué),、疫苗生產(chǎn)和大中型飼養(yǎng)企業(yè)等單位,。
DY-7000動(dòng)物疫病血凝分析儀是國(guó)內(nèi)*根據(jù)國(guó)標(biāo)中重大疫病免疫監(jiān)測(cè)方法研制的高新設(shè)備，配套使用自動(dòng)血凝分析管理軟件,，能自動(dòng)監(jiān)測(cè)常見重大動(dòng)物疫病的免疫抗體效價(jià),，及時(shí)掌握動(dòng)物疫病流行規(guī)律和疫情動(dòng)態(tài)，建立動(dòng)物免疫效果監(jiān)測(cè)記錄檔案,。系統(tǒng)當(dāng)前監(jiān)測(cè)項(xiàng)目有：豬瘟抗體正向間接血凝檢測(cè),、口蹄疫抗體正向間接血凝檢測(cè)、高致病性禽流感H5亞型抗體血凝抑制檢測(cè),、高致病性禽流感H7亞型抗體血凝抑制檢測(cè),、高致病性禽流感H9亞型抗體血凝抑制檢測(cè)、新城疫抗體血凝抑制檢測(cè),。

試驗(yàn)方法：
1 血凝（HA）試驗(yàn)
1） 在V型微量反應(yīng)板的1～12孔均孔加入0.025ml PBS,，換滴頭。
2） 吸取0.025ml血凝抗原加入*孔,，混勻,。
3） 從第1孔吸取0.025ml血凝抗原加入第2孔，混勻后吸取0.025ml加入第3孔,，如此進(jìn)行對(duì)倍稀釋至第11孔,，從第11孔吸取0.025ml棄去，換滴頭,。
4） 每孔再加0.025ml PBS,。
5） 每孔均加入0.025ml 1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液（將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入）。
6） 將反應(yīng)板在振蕩器上震蕩1～2分鐘或輕扣反應(yīng)板混合反應(yīng)物,，在室溫（20～25℃）下靜置40分鐘后觀察結(jié)果,，（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下）,，在對(duì)照孔紅細(xì)胞顯著呈鈕扣狀時(shí)判定結(jié)果,。
7） 結(jié)果判定  將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無(wú)呈淚滴狀流淌,。*血凝（不流淌）的抗原或病毒zui高稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位（HAU）,。
2  血凝抑制（HI）試驗(yàn)
1） 根據(jù)HA試驗(yàn)測(cè)定的效價(jià)，計(jì)算配制4個(gè)血凝單位(4HAU)抗原,。以*血凝的病毒zui高稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn),，終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU抗原的稀釋倍數(shù)。例如,，HA效價(jià)為1:256,，則4HAU抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64（256除以4）。
2） 加稀釋液：
在微量反應(yīng)板的第1～11孔加入0.025ml PBS,，第12孔加入0.05ml PBS,。
3） 稀釋待檢血清：
取1號(hào)待檢血清0.025ml加入*排第1孔,，充分混勻后吸0.025ml于第2孔，依次對(duì)倍稀釋至第10孔,，從第10孔吸取0.025ml棄去,。
取2號(hào)待檢血清加入第2排；取3號(hào)待檢血清加入第3排……均按上法稀釋,。
  注意,！每取一份血清時(shí)，必須更換吸頭,。
4） 稀釋陰性血清：
  在血凝板的第7排*孔加陰性血清0.025ml,，對(duì)倍稀釋至第3孔，混勻后從該孔取出0.025ml棄去,。
    5） 稀釋陽(yáng)性血清：
  在血凝板的第8排第1孔加陽(yáng)性血清0.025ml,，對(duì)倍稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出0.025ml棄去,。
6） 第1～11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液0.025ml,，在室溫（20～25℃）下靜置30分鐘或2～8℃ 50分鐘。
7） 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的雞紅細(xì)胞懸液,，震蕩混勻,，在室溫（20～25℃）下靜置20～30分鐘或2～8℃ 45～60分鐘，對(duì)照紅細(xì)胞將呈明顯鈕扣狀沉于孔底,。
結(jié)果判定 
以*抑制4 HAU抗原的zui高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價(jià),。
只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2log2，陽(yáng)性對(duì)照血清誤差不過(guò)1個(gè)滴度,，試驗(yàn)結(jié)果才有效,。
禽流感滅活疫苗的免疫效果判定：家禽免疫后21天進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)。禽流感抗體血凝抑制（HI）抗體效價(jià)≥24判定為合格
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格,。
新城疫免疫效果監(jiān)測(cè)：免疫21天后,，進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)?？贵w血凝抑制試驗(yàn)抗體效價(jià)≥25判定為合格
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格,。

【注意事項(xiàng)】 
（1）HA和HI試驗(yàn)影響因素甚多，應(yīng)嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件,。每加一試劑或樣品后需更換吸頭，同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制作用溫度和時(shí)間,。
（2）準(zhǔn)確配制紅細(xì)胞懸液,，使用時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖。
（3）用pH值7.0～7.2的PBS作為稀釋液,。
（4）抗原和陰,、陽(yáng)性血清若有污染,，應(yīng)廢棄。
（5）準(zhǔn)確配制4HAU抗原,，使用前需進(jìn)行滴定,，滴定好的抗原應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)用完。
（6）抗原和血清按規(guī)定保存,。凍干試劑應(yīng)按規(guī)定的體積用PBS溶解,。溶解后2～8℃保存不過(guò)1個(gè)月；可分裝成小包裝,，-70℃凍存,，隨用隨取。切忌反復(fù)凍融,。
（7）鴨,、鵝以及哺乳動(dòng)物的血清一般需進(jìn)行非特異性凝集和抑制素的處理。
（8）同一亞型不同毒株的HI試驗(yàn)抗原,，若抗原性存在差異,，則檢測(cè)同一血清的HI效價(jià)不同。
（9）在使用微量加樣器時(shí),，槍頭進(jìn)入試劑瓶面下約2~3ml深處,，不可過(guò)深。待槍頭撤出液面后斜貼在試劑瓶的瓶壁上,，淌走多余的液體,，防止形成液滴滴入凝集板孔中。
（10）雞紅細(xì)胞懸液是現(xiàn)配現(xiàn)用,，剩余的放于4℃保存,，如果出現(xiàn)溶血現(xiàn)象則不能使用。
（11）每次檢測(cè)可只做一份陰陽(yáng)性血清對(duì)照試驗(yàn),。
（12）試驗(yàn)完成后立即上機(jī)判讀,，否則易出現(xiàn)紅細(xì)胞下滑現(xiàn)象。
（13）凍干對(duì)照血清和抗原存放于-20℃,，溶解過(guò)后存放于4℃,。