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薄層層析操作要點有哪些,?
1、鋪板
鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠,,板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋;過稀,,水蒸發(fā)后,,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2,。研磨勻漿的時間,根據(jù)經(jīng)驗來定,,與空氣濕度有關(guān),,一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴,。勻漿的稀稠除影響板的平滑外,,也影響板涂層的厚度,進一步影響上樣量,。涂層薄,,點樣易過載;涂層厚,,顯色不那么明顯,。通常,板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大,,影響大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和,。
2,、點樣
盡量用小的點樣管,。如果有足夠的耐性,建議只用1微升的點樣管,。這樣,,點的斑點較小,展開的色譜圖分離度好,,顏色分明,。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,,點樣斑點擴散大,。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇,、乙酸乙酯,。點好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干,。
3、展開劑配制
選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,,強烈振搖使混合液充分混勻,,放置,如果分層,,取用體積大的一層作為展開劑,。不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配制展開劑,?;旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑,會造成層析的*失敗,。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求,,盡量達(dá)到實驗室儀器的高精確度,比如:取1ml的溶劑,,應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管,,移液管應(yīng)符合計量認(rèn)證要求,盡管多數(shù)時候這不是必須的,。
4,、展開系統(tǒng)的飽和
一般使用的是雙槽的展開缸,一槽用來放展開劑,,另一槽可加入氨水或硫酸,。把待展開的板放入兩槽間的平臺,斜架著,,蓋上展開缸的蓋子,。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸,并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和,,防止邊沿效應(yīng),,飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中,,不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大,,當(dāng)然動作應(yīng)該盡量輕、快,。
5,、溫濕度的控制
溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下,,通常溫度越低分離越好,,較難的分離需在低溫下分離,例如人參皂苷,。濕度的影響,,估計主要是影響薄層板的吸附能力,,導(dǎo)致選擇性(容量因子)的變化,濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定,。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜,,濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。
6,、顯色
噴顯色劑顯色重要是有好的霧化器,。