8
說說高質量培養(yǎng)基的實驗操作步驟
高質量培養(yǎng)基是用于人類多能干細胞的培養(yǎng)基,，它沒有外來動物成分,，化學成分清晰，并且適合無滋養(yǎng)細胞培養(yǎng),。該產(chǎn)品適用于系統(tǒng)中培養(yǎng)的干細胞,，可用于干細胞傳代,。它含有防止細胞凋亡和分化的干細胞保護因子,，并對細胞具有良好的保護作用。
1,、不需要滋養(yǎng)細胞,。
2、成分清晰,，批次之間的差異很小,。
3、適用于在Essential8系統(tǒng)中培養(yǎng)的人多能干細胞,。
4,、不含外來動物成分，大大降低了各種病毒,，霉菌和支原體污染的風險,。
高質量培養(yǎng)基實驗操作步驟：
1、基質膠包被的培養(yǎng)板：取出6孔板/12孔板,，并加入1mL/0.5mL即用型基質膠（AC-1001007）移至每個孔,，輕輕搖動6孔板/12孔板，使Matrigel*覆蓋培養(yǎng)皿的底部,。將其置于37℃的恒溫箱中,，保溫1h?2h。實驗前將其取出,，并放在干凈的工作臺/生物安全柜中以在室溫下平衡,。20分鐘如果暫時不使用，可以用Parafilm密封并在2-8°C下保存并在1周內使用,。
注意：①冷凍的干細胞數(shù)量約為1×106細胞/mL,，相當于6孔板中的1個孔,；②即用型基質膠對溫度敏感，因此請在使用后立即拿走,，并在使用后立即放回原處,。儲存在4°C的冰箱中，不要接觸Matrigel液面的瓶體直接接觸,，將影響基質膠的質量,。
2、首先將2?3mL干細胞培養(yǎng)基添加到15mL離心管中,，以備后用,。
3、解凍：將從液氮中取出的冷凍保存管快速浸入37℃的溫水中,，并迅速搖動使其在1?2min內解凍,；注意：應迅速從液氮中取出電池，以盡量減少其暴露于室溫的時間,。
4,、離心：將凍存管中的凍存溶液解凍后，滴加到裝有干細胞培養(yǎng)基的15mL離心管中,。將15mL離心管放入低速離心機中,，然后以1200rpm離心。3分鐘,；
5,、重懸：離心后，棄去上清液,，加入1mL人多能干細胞培養(yǎng)基移液,，吸干細胞沉淀約3至5次。
6,、接種：均勻吹吸后,，丟棄已平衡的即用型基質膠，將均勻吹干的干細胞懸液加入包被的6孔板中,，并在每個孔中填充2mL訓練系統(tǒng),。
7、高質量培養(yǎng)基培養(yǎng)：可將接種的6孔板置于倒置相差顯微鏡下,，觀察接種的干細胞的密度和細胞團的大小,。超過4個細胞的團塊更合格。水平的十字架很輕,。搖動6孔板/12孔板以均勻分布細胞,。在37°C和5％CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育。第二天觀察細胞的粘附,；
8,、更換培養(yǎng)基：從復蘇開始每隔24小時更換一次培養(yǎng)基,。