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說說高質(zhì)量培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)操作步驟
高質(zhì)量培養(yǎng)基是用于人類多能干細(xì)胞的培養(yǎng)基，它沒有外來動(dòng)物成分,，化學(xué)成分清晰,，并且適合無滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)。該產(chǎn)品適用于系統(tǒng)中培養(yǎng)的干細(xì)胞,，可用于干細(xì)胞傳代。它含有防止細(xì)胞凋亡和分化的干細(xì)胞保護(hù)因子,，并對(duì)細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用,。
1、不需要滋養(yǎng)細(xì)胞,。
2,、成分清晰，批次之間的差異很小,。
3,、適用于在Essential8系統(tǒng)中培養(yǎng)的人多能干細(xì)胞。
4,、不含外來動(dòng)物成分,，大大降低了各種病毒，霉菌和支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),。
高質(zhì)量培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1,、基質(zhì)膠包被的培養(yǎng)板：取出6孔板/12孔板，并加入1mL/0.5mL即用型基質(zhì)膠（AC-1001007）移至每個(gè)孔,，輕輕搖動(dòng)6孔板/12孔板,，使Matrigel*覆蓋培養(yǎng)皿的底部。將其置于37℃的恒溫箱中,，保溫1h?2h,。實(shí)驗(yàn)前將其取出,，并放在干凈的工作臺(tái)/生物安全柜中以在室溫下平衡。20分鐘如果暫時(shí)不使用,，可以用Parafilm密封并在2-8°C下保存并在1周內(nèi)使用,。
注意：①冷凍的干細(xì)胞數(shù)量約為1×106細(xì)胞/mL，相當(dāng)于6孔板中的1個(gè)孔,；②即用型基質(zhì)膠對(duì)溫度敏感,，因此請(qǐng)?jiān)谑褂煤罅⒓茨米撸⒃谑褂煤罅⒓捶呕卦?。?chǔ)存在4°C的冰箱中,，不要接觸Matrigel液面的瓶體直接接觸，將影響基質(zhì)膠的質(zhì)量,。
2,、首先將2?3mL干細(xì)胞培養(yǎng)基添加到15mL離心管中，以備后用,。
3,、解凍：將從液氮中取出的冷凍保存管快速浸入37℃的溫水中，并迅速搖動(dòng)使其在1?2min內(nèi)解凍,；注意：應(yīng)迅速?gòu)囊旱腥〕鲭姵?，以盡量減少其暴露于室溫的時(shí)間。
4,、離心：將凍存管中的凍存溶液解凍后,，滴加到裝有干細(xì)胞培養(yǎng)基的15mL離心管中。將15mL離心管放入低速離心機(jī)中,，然后以1200rpm離心,。3分鐘；
5,、重懸：離心后,，棄去上清液，加入1mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基移液,，吸干細(xì)胞沉淀約3至5次,。
6、接種：均勻吹吸后,，丟棄已平衡的即用型基質(zhì)膠,，將均勻吹干的干細(xì)胞懸液加入包被的6孔板中，并在每個(gè)孔中填充2mL訓(xùn)練系統(tǒng),。
7,、高質(zhì)量培養(yǎng)基培養(yǎng)：可將接種的6孔板置于倒置相差顯微鏡下，觀察接種的干細(xì)胞的密度和細(xì)胞團(tuán)的大小,。超過4個(gè)細(xì)胞的團(tuán)塊更合格,。水平的十字架很輕,。搖動(dòng)6孔板/12孔板以均勻分布細(xì)胞。在37°C和5％CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育,。第二天觀察細(xì)胞的粘附,；
8、更換培養(yǎng)基：從復(fù)蘇開始每隔24小時(shí)更換一次培養(yǎng)基,。