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多功能酶標儀靈敏度影響因素探究
現(xiàn)在，多功能酶標儀基本上是每個生物學(xué)實驗室的基礎(chǔ)科研設(shè)備,。市場上多功能酶標儀品牌主要有Bio-Tek,、BMG、MD,、PE,、Tecan等。每個品牌都有自己的特色和優(yōu)勢產(chǎn)品,。而各品牌廠家在對自己產(chǎn)品性能－比如說檢測靈敏度的描述時,，除了表征光吸收值的OD值參數(shù)外，像熒光檢測靈敏度,、發(fā)光檢測靈敏度等,，卻往往沒有一個統(tǒng)一的方式和定義（名稱等）。這對用戶在選購酶標儀時進行儀器間性能的對比會帶來一定的困惑,。我們來看看市場上的優(yōu)勢品牌在對熒光檢測靈敏度這一參數(shù)的不同的描述： |
,，對于靈敏度的描述，主要有“Sensitivity"和“Detection Limit"兩種說法,我們分別來看它們的定義： |
1.分析方法的檢出限：國際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC）對檢出限的規(guī)定：對各種光學(xué)分析方法,，可測量的最小分析信號XL以下式表示：
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2.儀器檢出限：用于評價儀器的檢測能量,，即：相對應(yīng)背景，儀器可靠檢測的最小信號,，通常用信噪比S/N來表示,，為S/N≥K,根據(jù)置信度概念，K可取2或3,，為合理的賦予值,。 B: Sensitivity：靈敏度。對于靈敏度概念而言,，在IUPAC的定義是：方法的靈敏度m表示被測組分濃度或含量改變一個單位時所引起的分析信號的變化,，即m=dX/dc。其中X為分析信號,，c為濃度或含量,。在分析方法的校正曲線上，一般可以認為靈敏度就是分析校正曲線的斜率,。曲線斜率越大,，表示靈敏度越高。但在儀器參數(shù)中所說的“Sensitivity"并不是表示這一概念,，而是具體指的是“DL（Detection Limit）或LOD（Limit Of Detection）",，比如BMG在Sensitivity的注解中就明確說明指的是“LOD"。如果上述（表中）參數(shù)描述的“Detection Limit"（Tecan/MD/PE）指的是“方法檢出限"且“Sensitivity"(BMG/Bio-Tek/Thermo)指的是“LOD"時,，則Sensitivity＝LOD＝DL＝Detection Limit,。雖然描述詞不同，但是概念是相同的,，其參數(shù)可以直接比較,。 |
目前從各廠家公開的資料中，只有BMG明確說明采用國際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC）的檢測標準去例明參數(shù),。也只有BMG公司在參數(shù)中明確寫明了其Sensitivity的定義,，包括定義、詳細的測定條件等,。例如在BMG最新推遲的高性能漸變?yōu)V片型光柵多功能酶標儀CLARIOstar的參數(shù)描述中,，其FI（熒光）頂讀的靈敏度為FI Filters (top) < 0.4 pM (< 8 amol/well Fluorescein, 384sv, 20 μL)，就在參數(shù)后面明確寫明了測試靈敏度時的方法：采用熒光素（Fluorescein）為底物做6點的標準曲線,，采用的是384 Small Volume微孔板,，20μL的檢測體系,。這里要清楚知道，測定參數(shù)時采用的微孔板類型以及檢測體系的體積非常重要,。因為不同的條件,，其靈敏度計算結(jié)果是不一樣的。下面表2為各酶標儀廠家的網(wǎng)站的參數(shù)資料： |
每個廠家都有不同的標準去定出其檢測靈敏度,。一般會把所用的檢測濃度和質(zhì)量寫出來,，但也有些廠家或型號只例出濃度單位，例如：Bio-Tek Neo,，MD SpectraMax M5/M3等,。要全面比較檢測靈敏度，其實要配合濃度,、質(zhì)量和檢測體積幾個要數(shù)作考慮,。如果只有濃度(M)，那實際檢測的體積是多少?200μl?100μl或是20μl?不同的體積會使實際檢測的質(zhì)量不同,，這可以是十倍或更多的差別,。 綜合以上各方面,，在對酶標儀的參數(shù)進行對比時,，單位的統(tǒng)一非常重要,，同時測定參數(shù)時采用的條件同樣重要,。對于眾多廠家的儀器,，其實很難用一個 一樣的方法去比較,，因為不同廠家所用的條件都不一樣。畢竟儀器的性能和表現(xiàn)是要用家使用出來,，而不只是靠把參數(shù)寫得漂亮,。 |