每個(gè)廠家都有不同的標(biāo)準(zhǔn)去定出其檢測靈敏度。一般會(huì)把所用的檢測濃度和質(zhì)量寫出來,,但也有些廠家或型號(hào)只例出濃度單位,,例如:Bio-Tek Neo,MD SpectraMax M5/M3等,。要全面比較檢測靈敏度,,其實(shí)要配合濃度、質(zhì)量和檢測體積幾個(gè)要數(shù)作考慮,。如果只有濃度(M),,那實(shí)際檢測的體積是多少?200μl?100μl或是20μl?不同的體積會(huì)使實(shí)際檢測的質(zhì)量不同,這可以是十倍或更多的差別,。
除此之外,,統(tǒng)一性的檢測標(biāo)準(zhǔn)也很重要。例如:BMG所有型號(hào)的頂讀熒光每次都會(huì)用384 small volume微孔板,,并以20μl的體積進(jìn)行檢測,。從表2中可以看到由中端研究型的FLUOstar Omega到 的PHERAstar FS都是用統(tǒng)一的檢測標(biāo)準(zhǔn)去量度和顯示其靈敏度。如果型號(hào)間的檢測標(biāo)準(zhǔn)不一,,如Tecan入門型號(hào)F200和高型號(hào)F500的參數(shù),,前者是用100μl做出的;后者是用10μl做出的,。這樣用戶會(huì)發(fā)現(xiàn)一個(gè)有趣現(xiàn)象 – 就是單看濃度,,F(xiàn)200(0.85pM)入門型好像比F500(1pM)高 型號(hào)更靈敏!當(dāng)然用戶也會(huì)有疑問,,為什么較低端F200比 的F500要多用10倍體積,?大家同樣是384孔板,,為什么檢測的體積標(biāo)準(zhǔn)不一樣呢?那是否那100μl做出來的參數(shù)用20μl時(shí)可以做出同樣的靈敏度(85 amol),?這相信值得用家去思考一下,。
BMG的所有參數(shù)是根據(jù)IUPAC標(biāo)準(zhǔn)去檢測出來,所用的方法,、體積,、微孔板、濃度和質(zhì)量等,,都清楚例明,。在384孔板中一貫采用20μl體積是因?yàn)檫@是接近實(shí)際實(shí)驗(yàn)的情況。有些廠家所用的檢測體積與現(xiàn)實(shí)情況其實(shí)有差距,,例如Biotek的Synergy 2熒光參數(shù)標(biāo)示為:“Fluorescein 1 pM typical (0.1 fmol/well 384-well plate) – Top",,雖然廠家沒有寫出來,但只要小心計(jì)算,,可得出384孔板時(shí)的參數(shù)是用100μl的體積去做檢測,。實(shí)際上,市場上的384孔板的每孔體積一般只有約110μl (例如:CORNING),,而微孔板廠家推薦使用體積為20μl -80μl,。如果用100μl去做檢測是有點(diǎn)不太現(xiàn)實(shí),因?yàn)轶w積太滿會(huì)令孔內(nèi)液體在檢測移動(dòng)過程中比較容易淺出,,這也使孔板在實(shí)驗(yàn)過程中無法使用振動(dòng)功能去搖勻孔內(nèi)的樣本,,影響檢測結(jié)果。再者,,使用384孔板的原因除了因?yàn)楦咄客?,更重要的是想用更小的樣本和試劑體積。如果在384孔板上要用到100μl的試劑樣本,,那跟原來想節(jié)省成本的原意就背道而馳了,。當(dāng)然,檢測體積愈小,,對(duì)儀器的檢測靈敏度要求愈高,,對(duì)廠家挑戰(zhàn)也愈大。但BMG寧可放棄用較大體積做出來的漂亮參數(shù),,也要忠于實(shí)際操作,,用小體積做出參數(shù)給客戶參考。事實(shí)上,,即使是BMG最入門的Optima系列的化學(xué)發(fā)光和熒光酶標(biāo)儀,,也被客戶用來發(fā)表了超過110份Nature或Nature Publishing Group的文章,,其優(yōu)良的性能實(shí)際是不容懷疑,。
綜合以上各方面,,在對(duì)酶標(biāo)儀的參數(shù)進(jìn)行對(duì)比時(shí),單位的統(tǒng)一非常重要,,同時(shí)測定參數(shù)時(shí)采用的條件同樣重要,。對(duì)于眾多廠家的儀器,其實(shí)很難用一個(gè) 一樣的方法去比較,,因?yàn)椴煌瑥S家所用的條件都不一樣,。畢竟儀器的性能和表現(xiàn)是要用家使用出來,而不只是靠把參數(shù)寫得漂亮,。