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PCR實驗是分子生物學中常見用的實驗之一,，在基因擴增,、核酸檢測、基因檢測等方面廣泛應用,。pcr擴增的原理和步驟如下：
一,、試劑準備：
PCR常用的試劑主要包括 DNA 模板、引物,、ddH 2 O,、 DNA 聚合酶以及特定的反應緩沖液、dNTP,、MgSO 4（可選）和 DMSO （可選）,。
二、PCR實驗前的準備
在開始PCR實驗之前,，必須準備好DNA模板（基因組DNA 或逆轉錄制備的cDNA）,、特異性引物（自己設計或用軟件設計），并選擇合適的商業(yè)酶（選擇符合您實驗目的的酶)
1.DNA聚合酶,。有許多商業(yè) DNA 聚合酶,，它們具有不同的特性。一般分為兩類：高保真聚合酶和普通Taq 聚合酶,。如果您想對沒有任何突變的特定 DNA 片段進行 PCR,，請選擇高保真聚合酶。如果只是想檢測特定序列的存在,，就選擇普通的 Taq 聚合酶,。如果要對T-vector連接的片段進行PCR,，要注意 ，因為大多數(shù)高保真聚合酶的產物都沒有 A-tailing,，所以應該選擇普通的Taq聚合酶或在PCR 實驗后添加 A-tailing,。
2.引物的特異性影響 PCR 成功的概率，良好的引物設計對 PCR 擴增的成功至關重要,。當您開始設計引物時,，應仔細考慮以下幾個原則：
①引物的長度。PCR引物一般在18-22bp左右,。這對于引物特異性和在退火溫度下的結合來說是足夠長的,。
②熔化溫度(Tm)。Tm 定義為在此溫度下,，DNA 雙鏈體的一半將解離成單鏈 DNA,。52-58C 范圍內的引物 Tm 是最佳的。
③GC 含量,。最佳 GC 含量應為 40-60%,。
④許多軟件可用于引物設計，例如primer5和Oligo,。這些軟件推薦的引物通?？梢詽M足我們的需求。
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