您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)！ 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
18017111930
當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>確認(rèn)RNA的質(zhì)量常用的三種方法
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是通過測(cè)定RNA的轉(zhuǎn)錄水平來評(píng)估基因的活力。RNA樣本提取的質(zhì)量直接影響基因表達(dá)分析,。影響RNA品質(zhì)的因素有以下三種：RNA濃度,、RNA純度和RNA完整性。
檢測(cè)RNA濃度,、純度和完整性的方式主要有以下幾種：
紫外分光光度計(jì)法：
測(cè)量260nm吸收值計(jì)算RNA濃度,，測(cè)量260nm/280nm吸收值的比值，用于評(píng)估RNA純度,。需要注意的是：在檢測(cè)核酸物質(zhì)時(shí)應(yīng)該在固定的PH溶液中進(jìn)行,。
260nm/280nm的比值范圍在 1.9~2.1 之間。＜1.9,，說明有蛋白質(zhì)殘留,；＞2.1，說明RNA可能發(fā)生降解,。
瓊脂糖凝膠電泳：
完整的RNA通常有三條帶,，最亮的是28S條帶，其次是18S條帶,，最淡的是5S條帶（部分試劑盒提取時(shí)會(huì)過濾掉5S條帶）,。通過瓊脂糖凝膠電泳可以檢測(cè)28S和18S的比值。該方法主要用于檢測(cè)RNA的純度和完整性。
如果28S和18S條帶明亮,、清晰,、條帶銳利，28S的亮度在18S條帶的兩倍以上,，我們認(rèn)為RNA的質(zhì)量,。
若RNA條帶出現(xiàn)彌散，原因可能：RNA被核酸酶降解,、電壓或電流過大,、上樣量過高或過低等。
上述兩種方法在實(shí)驗(yàn)室比較常用,，此外還有幾種檢測(cè)方式供大家選擇,。
熒光染料檢測(cè)：
通過熒光染料和RNA結(jié)合，熒光活性增強(qiáng),。此方法的靈敏度較高,，主要用于檢測(cè)RNA的濃度。
微毛細(xì)管電泳：
可使用軟件的RIN（RNA Integrity Number）分?jǐn)?shù)評(píng)估,，10為RNA完整性最好,，0為最差。此方法的靈敏度和分辨率較高,，可用于檢測(cè)RNA濃度,、純度和完整性。
3’-5’完整性檢測(cè)：
是在一個(gè)RNA樣本中檢測(cè)GAPDH mRNA的完整性來代表所有RNA的完整性,，主要用于檢測(cè)RNA的完整性,。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性,、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),，化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任,。
溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量,。
