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當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)胞實驗驗證基因功能
一,、實驗材料： 疾病對應(yīng)的細(xì)胞系（或者是原代細(xì)胞）,，預(yù)算充足情況下可以選擇2種細(xì)胞系,，暫定為：A和B細(xì)胞
二、實驗方案：敲低兩種細(xì)胞的目的基因1,、過表達(dá)兩種細(xì)胞的目的基因1（若是miRNA可以使用mimics,、inhibitor）
三,、干擾片段篩選：2種細(xì)胞都需要篩選（當(dāng)用mimics和inhibitor時也需要初步篩選表達(dá)效果）
目的基因1干擾片段篩選：針對目的基因1設(shè)計并合成3條siRNA及NC,，轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，QPCR篩選出干擾 的片段進(jìn)行后續(xù)實驗；
四,、實驗分組：A或B細(xì)胞
A
A+siRNA NC對照組
A+siRNA目的基因1干擾
A+過表達(dá)目標(biāo)基因1
A+過表達(dá)空載
抑制劑處理濃度1
五,、檢測項目：
細(xì)胞增殖或者細(xì)胞毒性檢測（CCK法/MMT），
流式檢測細(xì)胞周期,，
流式檢測細(xì)胞凋亡,，
細(xì)胞侵襲實驗（transwell），遷移,、劃痕
WB檢測細(xì)胞信號通路中蛋白的表達(dá)變化,，
QPCR檢測信號通路中基因的表達(dá)，
免疫熒光檢測下游信號通路蛋白
流式多色檢測某些marker指標(biāo)
Coip檢測A和B蛋白是否結(jié)合
雙熒光素酶檢測A和B是否結(jié)合
油紅O染色
生化檢測：SOD,，CAT等
透射電鏡
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