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當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>免疫酶標(biāo)技術(shù)
1） 直接法
1．標(biāo)本固定,。
2．PBS洗滌2×3分鐘,。
3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘,。
4．正常血清（1：10）孵育,，室溫20分鐘。
5．滴加酶標(biāo)記的抗體37℃1小時或4℃過夜,。
6．PBS洗滌3×3分鐘,。
7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色結(jié)果,。DAB＋H2O2應(yīng)用前15分鐘配制,。
8．充分水洗后，復(fù)染,、脫水,、透明、封片,、鏡檢,。
2） 間接法
1．標(biāo)本固定。
2．PBS洗滌2×3分鐘,。
3．1％H2O2（或1％H2O2 甲醇）抑制內(nèi)源性過氧化物,，室溫10～20分鐘。
4．正常血清（1：10）孵育,，室溫20分鐘,。
5．滴加第一抗體,，37℃1小時或4℃過夜,。
6．PBS洗滌3×3分鐘。
7．滴加酶標(biāo)二抗,，室溫1小時,。
8．PBS洗滌3×3分鐘。
9．0.04％DAB＋0.03 ％H2O2顯色5～10分鐘。
10． 充分水洗后,，復(fù)染,、脫水、透明,、封片,、鏡檢。
3） PAP法（過氧化物酶抗過氧化物酶抗體復(fù)合物法）
1．標(biāo)定固定后,，PBS洗滌,。
2．1％H2O2（或1％H2O2 甲醇）阻斷內(nèi)源性過氧化物，室溫10～20分鐘,。
3．PBS洗滌2×3分鐘,。
4．正常血清（二抗的正常血清）孵育，室溫20分鐘,。
5．滴加一抗,，室溫1小時或4℃過夜。
6．PBS洗滌3×3分鐘,。
7．滴加二抗,，室溫30分鐘。
8．PBS洗滌3×3分鐘,。
9．加PAP復(fù)合物,，室溫60分鐘。
10． PBS洗滌3×3分鐘,。
11． 0.04％DAB＋0.03％ H2O2顯色5～10分鐘,。
12． 充分水洗。
13． 蘇木精復(fù)染,，封片觀察,。
4） 雙PAP法
1～10同單PAP法。
11． 二次加酶標(biāo)二抗,。
12． PBS洗,。
13． 二次加PAP。
14． PBS洗,。
15． 0.04％DAB＋0.03 ％H2O2顯色5～10分鐘,。
16． 蘇木精復(fù)染核，封片,，鏡檢,。
5） ABC法（卵白素－生物素－過氧化物酶復(fù)合物法）
1～8同PAP法
9）加ABC液，室溫60分鐘,。
10） PBS洗,。
11） 0.04％DAB＋0.03％ H2O2顯色5～10分鐘,。
12） 充分水洗。
13） 蘇木精復(fù)染核,，封片,，鏡檢。
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