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中級(jí)會(huì)員 | 第22年

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超微量紫外/熒光全功能分光光度計(jì)在RNA質(zhì)控的應(yīng)用

時(shí)間:2023/5/29閱讀:924
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RNA質(zhì)控,,我來幫你!
 
小編心里話:RNA質(zhì)控是個(gè)技術(shù)活兒,!
 
對(duì)于每天泡在實(shí)驗(yàn)室的人來說,,qPCR已是家常便飯。毫無疑問濃度高,,純度好,,片段完整,才是我們理想中的RNA樣品,。然而,,RNA總是嬌氣的存在!室溫或4度極易降解,,提取的時(shí)候容易有污染物殘留,。因此完整的RNA質(zhì)控包含了三個(gè)方面:濃度質(zhì)控,純度質(zhì)控,,片段完整性質(zhì)控,。
 
如何把控RNA質(zhì)量,繼續(xù)反轉(zhuǎn)錄呢,?
 
有一款RNA質(zhì)控的高手,,既可以提供RNA濃度質(zhì)控,也可以提供RNA純度質(zhì)控,,沒錯(cuò),,就是美國Denovix公司提供的DS-11FX超微量紫外/熒光全功能分光光度計(jì),看上去酷酷的RNA純度質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)方法是超微量分光光度計(jì)(光吸收)法,通過監(jiān)控A260/230和A260/280的比值來判定RNA的純度,。通常A260/280的比值范圍在1.8-2.0之間,,如果大于2.0則說明RNA已經(jīng)降解,如果低于1.8則說明含有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì),;而A260/230的比值如果小于2,,則表明RNA中含有酚類,鹽等雜質(zhì),。DS-11FX的微量光度計(jì)功能可以幫助科研人員來準(zhǔn)確的判定RNA樣品的純度,。
 
下圖為RNA紫外法檢測示意圖,A260/280和A260/230都不在正常的比值范圍,,說明RNA樣品純度很差,,儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)行提示,兩個(gè)黃色小三角就是警示圖標(biāo)哦,,點(diǎn)擊萌萌的黃色三角警示,,儀器會(huì)顯示污染物的種類,夠智能吧,,這就是DS-11的SmartQC功能

圖1 總RNA的測量界面圖(美國DeNovix,,DS-11FX)
 
RNA濃度質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)方法是熒光法,除非是純度很高的RNA也可以采用紫外法,。熒光法采用RNA特異性染料,,可以準(zhǔn)確的測量RNA濃度。DS-11FX不但提供RNA濃度質(zhì)控,,也可以提供DNA和蛋白的濃度精確控制,,功能超級(jí)強(qiáng)大哦。
 
dsDNA,,RNA,ssDNA,,Protein單獨(dú)的熒光檢測app
 
發(fā)表在Cell stem cell的文章PAX3 Confers Functional Heterogeneity in Skeletal Muscle Stem Cell Responses to Environmental Stress,,作者提取衛(wèi)星細(xì)胞的總RNA,采用DS-11FX超微量/熒光全功能分光光度計(jì)進(jìn)行RT-PCR之前的RNA的質(zhì)量把控和濃度鑒定,。

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