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超微量紫外/熒光全功能分光光度計(jì)在RNA質(zhì)控的應(yīng)用
RNA質(zhì)控,，我來(lái)幫你,！
小編心里話(huà)：RNA質(zhì)控是個(gè)技術(shù)活兒！
對(duì)于每天泡在實(shí)驗(yàn)室的人來(lái)說(shuō),，qPCR已是家常便飯,。毫無(wú)疑問(wèn)濃度高，純度好,，片段完整，才是我們理想中的RNA樣品,。然而,，RNA總是嬌氣的存在！室溫或4度極易降解,，提取的時(shí)候容易有污染物殘留,。因此完整的RNA質(zhì)控包含了三個(gè)方面：濃度質(zhì)控，純度質(zhì)控,，片段完整性質(zhì)控,。
如何把控RNA質(zhì)量,，繼續(xù)反轉(zhuǎn)錄呢？
有一款RNA質(zhì)控的高手,，既可以提供RNA濃度質(zhì)控,，也可以提供RNA純度質(zhì)控，沒(méi)錯(cuò),，就是美國(guó)Denovix公司提供的DS-11FX超微量紫外/熒光全功能分光光度計(jì),，看上去酷酷的RNA純度質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)方法是超微量分光光度計(jì)（光吸收）法，通過(guò)監(jiān)控A260/230和A260/280的比值來(lái)判定RNA的純度,。通常A260/280的比值范圍在1.8-2.0之間,，如果大于2.0則說(shuō)明RNA已經(jīng)降解，如果低于1.8則說(shuō)明含有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì),；而A260/230的比值如果小于2,，則表明RNA中含有酚類(lèi)，鹽等雜質(zhì),。DS-11FX的微量光度計(jì)功能可以幫助科研人員來(lái)準(zhǔn)確的判定RNA樣品的純度,。
下圖為RNA紫外法檢測(cè)示意圖，A260/280和A260/230都不在正常的比值范圍,，說(shuō)明RNA樣品純度很差,，儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)行提示，兩個(gè)黃色小三角就是警示圖標(biāo)哦,，點(diǎn)擊萌萌的黃色三角警示,，儀器會(huì)顯示污染物的種類(lèi)，夠智能吧,，這就是DS-11的SmartQC功能
圖1 總RNA的測(cè)量界面圖（美國(guó)DeNovix,，DS-11FX）
RNA濃度質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)方法是熒光法，除非是純度很高的RNA也可以采用紫外法,。熒光法采用RNA特異性染料,，可以準(zhǔn)確的測(cè)量RNA濃度。DS-11FX不但提供RNA濃度質(zhì)控,，也可以提供DNA和蛋白的濃度精確控制,，功能超級(jí)強(qiáng)大哦。
dsDNA,，RNA,，ssDNA，Protein單獨(dú)的熒光檢測(cè)app
發(fā)表在Cell stem cell的文章PAX3 Confers Functional Heterogeneity in Skeletal Muscle Stem Cell Responses to Environmental Stress,，作者提取衛(wèi)星細(xì)胞的總RNA,，采用DS-11FX超微量/熒光全功能分光光度計(jì)進(jìn)行RT-PCR之前的RNA的質(zhì)量把控和濃度鑒定。