細胞計數是確定培養(yǎng)中鋪板的細胞濃度,、確定細胞活力和評估細胞分離程序結果的一個組成部分,。建議在細胞分離之前進行初始細胞計數；然后可以將該數字與細胞分離后的細胞計數進行比較,，以計算細胞恢復率,。此外，當預期細胞活力可能會降低時,，應進行活細胞計數,，例如，在處理冷凍保存的細胞或離體操作的細胞時,。本文描述了如何使用3%乙酸和亞-CH3藍進行總有核細胞計數,，以及如何通過臺盼藍染料排除進行活細胞計數。

實驗步驟和方法：

I部分：樣品制備

選項1：用3%乙酸和亞-CH3藍對總有核細胞計數進行細胞稀釋

使用磷酸鹽緩沖鹽水或無血清培養(yǎng)基對充分混合的單細胞懸浮液進行適當稀釋,。為了準確表示濃度,，請使用至少20μL的細胞懸浮液進行稀釋。

示例：制備10倍稀釋液

在微量離心管或96孔板的孔中加入180μL的3%乙酸和亞-CH3藍,?；旌霞毎麘腋∫?，將20μL添加到含有3%乙酸和亞-CH3藍的試管或孔中。

選項2：通過臺盼藍染料排除對活細胞計數進行細胞稀釋

確保要計數的細胞懸浮液*重新懸浮,。在細胞沉降之前,，將適量的細胞懸液(20-200μL)放入離心管中。加入等體積的0.4%臺盼藍并輕輕混合,。將混合物在室溫(15°C–25°C)下孵育5分鐘,。

II部分：使用血細胞計數器進行細胞計數

通過用70%C2H6O清潔腔室表面來制備血細胞計數器。擦干,。將蓋玻片放在腔室上,。

使用20μL移液器重新懸浮細胞混合物，并將10μL的染色細胞放入血細胞計室,。

注意：小心不要移動蓋玻片,。允許毛細作用將樣品吸入。

將血細胞計數器放在雙目光學顯微鏡的載物臺上,。將顯微鏡調整到10倍放大倍率并聚焦在細胞上,。

使用手動計數計數器，計算血細胞計數器四個外部正方形中的每一個中的細胞（染色的細胞核）（圖1A）,，包括位于底部和左側周邊的細胞,，但不包括位于頂部和右手邊（圖1B）。如果在第一部分中使用了3%乙酸和亞-CH3藍,，則計算染色的細胞核,。如果在第一部分中使用了臺盼藍，則計算未染色的活細胞,。

細胞計數儀進行細胞計數實驗的步驟

會員登錄

收藏該商鋪

提示