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當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)胞計數(shù)儀操作方法
實驗步驟和方法：
I部分：樣品制備
選項1：用3%乙酸和亞-CH3藍(lán)對總有核細(xì)胞計數(shù)進(jìn)行細(xì)胞稀釋
使用磷酸鹽緩沖鹽水或無血清培養(yǎng)基對充分混合的單細(xì)胞懸浮液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,。為了準(zhǔn)確表示濃度，請使用至少20μL的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行稀釋,。
示例：制備10倍稀釋液
在微量離心管或96孔板的孔中加入180μL的3%乙酸和亞-CH3藍(lán),。混合細(xì)胞懸浮液,，將20μL添加到含有3%乙酸和亞-CH3藍(lán)的試管或孔中,。
選項2：通過臺盼藍(lán)染料排除對活細(xì)胞計數(shù)進(jìn)行細(xì)胞稀釋
確保要計數(shù)的細(xì)胞懸浮液*重新懸浮,。在細(xì)胞沉降之前，將適量的細(xì)胞懸液(20-200μL)放入離心管中,。加入等體積的0.4%臺盼藍(lán)并輕輕混合,。將混合物在室溫(15°C–25°C)下孵育5分鐘。
II部分：使用血細(xì)胞計數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)
通過用70%C2H6O清潔腔室表面來制備血細(xì)胞計數(shù)器,。擦干,。將蓋玻片放在腔室上。
使用20μL移液器重新懸浮細(xì)胞混合物,，并將10μL的染色細(xì)胞放入血細(xì)胞計室,。
注意：小心不要移動蓋玻片。允許毛細(xì)作用將樣品吸入,。
將血細(xì)胞計數(shù)器放在雙目光學(xué)顯微鏡的載物臺上,。將顯微鏡調(diào)整到10倍放大倍率并聚焦在細(xì)胞上。
使用手動計數(shù)計數(shù)器,，計算血細(xì)胞計數(shù)器四個外部正方形中的每一個中的細(xì)胞（染色的細(xì)胞核）（圖1A）,，包括位于底部和左側(cè)周邊的細(xì)胞，但不包括位于頂部和右手邊（圖1B）,。如果在第一部分中使用了3%乙酸和亞-CH3藍(lán)，則計算染色的細(xì)胞核,。如果在第一部分中使用了臺盼藍(lán),，則計算未染色的活細(xì)胞。
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