1。材料準備
在9cm2培養(yǎng)皿上鋪一薄層培養(yǎng)基,，把材料(一般用未成熟胚,、成熟胚、小愈傷組織,、懸浮細胞,、原生質(zhì)體等)平鋪于培養(yǎng)皿中心，直徑在3cm范圍內(nèi),。
2．金粉的處理
取60mg金粉或鎢粉置于離心管中，加入lml無水乙醇,，充分振蕩3min,，以9615g離心1rain，去上清,，再加入lml無菌水充分混勻后,，以9615g離心，重復上述步驟3次。最后,，將金粉懸浮于lml無菌蒸餾水中,，置4‘C或室溫下儲存。
3．DNA的處理
取50tA金粉懸浮液,，依次加入5rd的質(zhì)粒DNA(1．0／lg～1)溶液,、50／／l 0．1mol／L亞精胺(所用的溶液經(jīng)無菌消毒)，振蕩3rain后,，在室溫下放置10min,，以9615g離心10s，棄去上清液,；加入250~1無水乙醇,，振蕩后以9615g離心10s，棄上清液,。沉淀重新懸浮于60／1l無水乙醇中,，可供5槍(每槍10~1)使用。
4．基因槍的操作
基因槍的所有操作均在無菌條件下進行,，具體步驟如下：
1)先用70％乙醇對基因槍表面及樣品室進行消毒,。同時，用70％乙醇將阻擋網(wǎng)和可裂圓片,，微彈載體及其固定器,、固定工具浸泡15min后，放在超凈臺上晾干,?？闪涯て⒐潭ㄉw,、微彈載體發(fā)射裝置可用70％乙醇進行表面滅菌,，吹干。
2)將微粒載片嵌入固定環(huán)中,，取DNA及金粉的混合物加于微粒載片中心,，干燥lmin左右。
3)安裝可裂膜于其托座上,，順時針擰到氣體加速器上,。
4)將空間環(huán)、阻擋網(wǎng),、阻擋網(wǎng)托座,、微粒載片及固定環(huán)(帶有微粒的面朝下)安裝好，旋緊蓋子,，插入搶中,。
5)把樣品放在轟擊室中,，關好門。
6)打開氦氣瓶的總閥,，順時針轉氦氣調(diào)節(jié)閥,，使氦壓表指針的示數(shù)高于可裂膜壓力200Psi(＝1．379MPa)。
7)打開基因槍及變壓器開關,。
8)按動真空鍵,，待真空度至26—28in Hg(＝88．05～94．82kPa)時，迅速按下Hold鍵,，接著按住發(fā)射鍵,，并保持不動，直到激發(fā)為止,。
9)按通氣鍵待真空表歸零后,，取出樣品。
10)關機,。
把氦氣瓶的總開關旋緊,，打一次空槍，把氦壓表指針歸零后,，再逆時針旋轉氦壓表調(diào)節(jié)閥,；關閉基因槍的總開關及變壓器開關。
