熒光定量PCR儀的關(guān)鍵參數(shù)和重要特性 在選購熒光定量PCR儀時(shí),幾個(gè)關(guān)鍵參數(shù)要注意:
1.儀器的檢測(cè)通量(Throughput)
首先要考慮實(shí)驗(yàn)室目前需要使用定量PCR儀的頻率,。加州大學(xué)舊金山分校癌癥中心的基因組分析設(shè)備負(fù)責(zé)人David Ginzinger檢測(cè)過市面上絕大多數(shù)的定量PCR儀,。他表示,如果不是大規(guī)模批量使用,,比如說主要是用來檢測(cè)驗(yàn)已知基因,,那確實(shí)不需要昂貴的產(chǎn)品。但是如果是那些需要尋找新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室,,就需要能容納384孔板,、運(yùn)行時(shí)間更快的儀器。不過僅有這么一件高通量的儀器是不夠快的,,你會(huì)發(fā)現(xiàn)樣品制備成為限速的瓶頸,。所以高通量的實(shí)驗(yàn)室往往需要進(jìn)一步的自動(dòng)化儀器,只要“按一下鈕”,,儀器就會(huì)自動(dòng)處理樣品,、純化核酸和制備PCR模板。
2.多重?cái)U(kuò)增的能力
多重?cái)U(kuò)增越來越熱,。實(shí)時(shí)定量PCR儀也不能幸免,。定量PCR儀擁有多個(gè)檢測(cè)通道,因而儀器就可以檢測(cè)同一個(gè)樣品槽里多個(gè)模板的擴(kuò)增過程,。新的LightCycler2.0 有6個(gè)檢測(cè)通道,,比原來多了3個(gè),。SmartCyclerⅡ有4個(gè)檢測(cè)通道。以文庫產(chǎn)品而名滿天下的Stratagene也有一種價(jià)格不到Roche的一半,、口碑不錯(cuò)的定量PCR儀Mx3000P,,也就是4個(gè)檢測(cè)通道。不過多重?cái)U(kuò)增并非人人適用,,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了,。
3.軟件
當(dāng)你準(zhǔn)備選擇一臺(tái)定量PCR儀,你必須要檢測(cè)附帶的軟件,。使用方便嗎,,是否可以進(jìn)行你所需要的分析,輸出格式有幾種,。不過,,你需要留意,太容易使用的軟件是不是功能比較簡單而無法進(jìn)行復(fù)雜計(jì)算,,以前的軟件還需要你做進(jìn)一步分析,,新的軟件已經(jīng)可以處理一切了。除了基本功能,,部分軟件還可以有更多的功能,比如引物和探針設(shè)計(jì),、多重分析設(shè)計(jì),、背景校正、數(shù)據(jù)歸一化等等,。Roche應(yīng)用科學(xué)部的應(yīng)用和技術(shù)服務(wù)部負(fù)責(zé)人Willian Demyan 就強(qiáng)調(diào):定量PCR是一個(gè)幾何擴(kuò)增的過程,,開始時(shí)一個(gè)拷貝之差,結(jié)果就有幾何數(shù)量級(jí)之別,。
4.靈活性
大規(guī)模繁忙的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備*固然令人羨慕,,常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室同樣可以有精彩的選擇。現(xiàn)在的供應(yīng)商都擁有眾多的技術(shù)專家,,不單了解你的目前需要,,還非常周到地為你考慮了以后可能的需求變化,比如提供多種可升級(jí)配件和模塊,。BioRad的MyCycler就可以選擇模塊而升級(jí)為實(shí)時(shí)定量,。ABI的定量PCR儀有多種不同的樣品槽,可以將96孔槽變?yōu)殡p384孔槽而滿足部分高通量的需求,。對(duì)于剛開始小量做qPCR的實(shí)驗(yàn)室來說,,SmartCyclerⅡ定量PCR儀是一個(gè)好選擇,一個(gè)基本模塊有16個(gè)獨(dú)立控溫樣品槽,,可以同時(shí)或者前后分別進(jìn)行16個(gè)*獨(dú)立的不同實(shí)驗(yàn),, “隨機(jī)存取”,;當(dāng)實(shí)驗(yàn)室需要較大規(guī)模實(shí)驗(yàn)時(shí),可以非常經(jīng)濟(jì)地升級(jí),,從1個(gè)增加到6個(gè)基本模塊,,也就是96樣品孔。雖然不能用96孔板,,但是當(dāng)一個(gè)學(xué)生開始小量實(shí)驗(yàn),,其他人還可以隨時(shí)插進(jìn)去開始自己的獨(dú)立實(shí)驗(yàn),而且互不干擾,,就是增加了靈活性,。對(duì)于剛開始只做少量實(shí)驗(yàn)而且預(yù)算較緊張的實(shí)驗(yàn)室來說是非常靈活的選擇。