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一、核酸檢測實驗室應(yīng)劃分為五個獨立的工作區(qū),。五個工作區(qū)應(yīng)按照從清潔,、半污染到污染的順序排列。各區(qū)內(nèi)的試劑和耗材不能再進入任何“上游”區(qū)域,。
(1)試劑配置和貯存區(qū):本區(qū)的功能是實驗相關(guān)試劑(如核算提取液,、乙醇等)的配置和貯存(包括商業(yè)化的試劑,如PCR反應(yīng)緩沖液,、Taq聚合酶和dNTPs等),。用于PCR擴增的試劑建議分裝后保存。
(2)樣品制備區(qū):本區(qū)的功能為待檢樣品的保存,、核酸的提取,、貯存等。進行RNA檢測的實驗室,,在此區(qū)域內(nèi)應(yīng)辟出專門的RNA操作區(qū),,或安裝一臺Ⅱ級生物安全柜或外排風(fēng)式的排風(fēng)櫥來替代。
(3)PCR反應(yīng)配制區(qū):本區(qū)的功能為配制,、分裝PCR主反應(yīng)混合液以及加入核酸模板,。對于使用巢式PCR進行檢測的實驗室,,建議在此區(qū)安裝一臺Ⅱ級生物安全柜或外排風(fēng)式的排風(fēng)櫥,,,頭一輪的擴增產(chǎn)物添加至第二輪的主反應(yīng)混合液的操作可在此區(qū)進行,。
(4)擴增區(qū):核酸擴增。加了DNA或RNA等模板的反應(yīng)管應(yīng)蓋好管蓋后才拿到本區(qū),。
(5)擴增產(chǎn)物分析區(qū):本區(qū)的功能為擴增片段的測定,。本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源,應(yīng)注意避免通過本區(qū)的物品將擴增產(chǎn)物帶出,。對于使用定量PCR進行檢測的實驗室,,此產(chǎn)物分析區(qū)可以省略。
二,、以上各區(qū)域擁有明確的標記,。進入各工作區(qū)域應(yīng)盡量按單一方向進行,即試劑配制和貯存區(qū),、樣品制備區(qū),、PCR反應(yīng)配制區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū),。
三,、每個工作區(qū)域內(nèi)都應(yīng)有專項使用的設(shè)備,包括加樣設(shè)備,,如移液器,、吸頭等。適當時,,可以用顏色或其他方式對不同區(qū)域內(nèi)的實驗用品加以區(qū)分,,并避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備和實驗用品混用。
四,、適宜時,,實驗室內(nèi)可配置便攜式紫外消毒裝置,用于各工作區(qū)域內(nèi)的實驗表面,、臺面,、地面等的紫外消毒。
五,、定期對擴增產(chǎn)物分析用1mol/L的鹽酸擦拭臺面,,以防擴增產(chǎn)物的污染。用過的電泳凝膠和電泳緩沖液要集中處理,。
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