常規(guī)的轉(zhuǎn)染包括脂質(zhì)體，電轉(zhuǎn)化和病毒法,。普通的293,、Hela等細(xì)胞系，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染也能達(dá)到70-80%,。而對于其他一些極難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,，如原代神經(jīng)元，原代神經(jīng)干細(xì)胞,，免疫細(xì)胞等來說,，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染不僅轉(zhuǎn)化效率很低（約10%），而且細(xì)胞死亡率*,。因此有些研究人員不得不轉(zhuǎn)用更加昂貴而且毒性更大的病毒包被法,。病毒法可以提高轉(zhuǎn)化效率，但是在后續(xù)培養(yǎng)中,，細(xì)胞死亡率很高,，細(xì)胞自然的生理生化特性遭到破壞，無法后續(xù)實驗,。而電穿孔技術(shù)的發(fā)展及所具備的強(qiáng)大優(yōu)勢則越來越受到科研人員的重視,。

從上個世紀(jì)80年代一臺電轉(zhuǎn)化儀誕生至今，大部分電轉(zhuǎn)化儀的波形仍是單向高壓方波（如下圖）,，細(xì)胞死亡率*,。如小鼠精原干細(xì)胞這種脆弱的細(xì)胞就會全部死亡。

為了解決單向高壓方波的問題，出現(xiàn)了需要配備特殊試劑的電轉(zhuǎn)化儀,。它延續(xù)了傳統(tǒng)的方波,，并設(shè)定了固定的參數(shù)。為了提高轉(zhuǎn)化效率,，每換一種或幾種細(xì)胞,，就必須重新購買不同的轉(zhuǎn)染試劑，導(dǎo)*高的試劑使用成本,，多數(shù)用戶表示難以接受,。而且由于“黑匣子”設(shè)計模式，用戶只能知道轉(zhuǎn)染程序序列號,，無法了解具體的轉(zhuǎn)化參數(shù),，更無法優(yōu)化設(shè)定參數(shù)！

因此,，無需特殊轉(zhuǎn)染試劑輔助,，又能顯著提高轉(zhuǎn)化效率和存活率的電轉(zhuǎn)化技術(shù)的研發(fā)就成為細(xì)胞轉(zhuǎn)染的發(fā)展方向。

隨著電傳孔技術(shù)質(zhì)的飛躍,，日本BEX公司2012年發(fā)布了創(chuàng)新的瞬時穿孔高壓+動態(tài)衰減/靜態(tài)衰減/恒流+反向方波脈沖組合模式,，完*了上述問題。脈沖波形圖如下：

瞬時高壓可快速在細(xì)胞膜表面打孔并減少細(xì)胞死亡,；隨后切換成幾十伏的低壓來驅(qū)動DNA高效進(jìn)入細(xì)胞,，反向脈沖可以顯著增加DNA進(jìn)入細(xì)胞的幾率，大幅提高轉(zhuǎn)化效率,。在一年時間內(nèi),，用CUY21 EDIT II 轉(zhuǎn)化過的細(xì)胞超過百種，其中多數(shù)都是極難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,，包括大鼠胚胎原代神經(jīng)元細(xì)胞,、NIH/3T3、NG108-15,、raw264.7,、SSC、HepG-2,、N2a,、PC3、LCL,、NIT1,、小鼠胚胎原代干細(xì)胞以及細(xì)胞系，和原代小鼠β胰島細(xì)胞團(tuán),、人B細(xì)胞系,、人淋巴細(xì)胞等等,，帶給用戶非常驚喜的轉(zhuǎn)化效果。

如下圖：原代神經(jīng)元的轉(zhuǎn)化效果圖

針對一些非常脆弱的組織或細(xì)胞（如成年鼠腦）,，需要采用恒定的電流進(jìn)行穿孔,。組合脈沖的恒流轉(zhuǎn)化模式，是一種可以滿足這種轉(zhuǎn)化要求的技術(shù),。

請見下圖,，分別用動態(tài)衰減脈沖模式，靜態(tài)衰減脈沖模式和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法平行對小鼠胰島瘤β細(xì)胞系進(jìn)行轉(zhuǎn)染：

由上可見,，針對很多細(xì)胞,， 動態(tài)衰減脈沖模式可以比靜態(tài)衰減脈沖模式提供更高的轉(zhuǎn)染效率，同時保證了細(xì)胞的存活率,，為極難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的研究開辟了新的一頁。

關(guān)于上述組合脈沖技術(shù)發(fā)明廠家的介紹：

BEX公司誕生于1990年,，是專業(yè)研發(fā),，生產(chǎn)電轉(zhuǎn)化儀和細(xì)胞融合儀的廠家。1998年推出CUY21EDIT活體基因電轉(zhuǎn)化儀,，開創(chuàng)了活體基因轉(zhuǎn)化的新時代,，并樹立了CUY21在活體領(lǐng)域的，已有超過2000臺專業(yè)的CUY21系列轉(zhuǎn)化儀服務(wù)于科研工作者,，并延續(xù)著的優(yōu)勢,，發(fā)表在Nature,Cell等雜志的文獻(xiàn)超過了數(shù)百篇。

2012年10月,，回顧經(jīng)典,，BEX再次發(fā)布具有歷程碑意義的超級多脈沖活體/細(xì)胞電轉(zhuǎn)化儀CUY21 EDIT II。除了傳統(tǒng)的活體轉(zhuǎn)化優(yōu)勢,，CUY21EDIT II更是在細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)上達(dá)到了的高度,。無需任何特殊試劑即可得到*的轉(zhuǎn)染效率，尤其是極難轉(zhuǎn)的細(xì)胞系,，如原代神經(jīng)元的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)60%甚至更高,。這一突破解決了長久以來原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染存活率低、轉(zhuǎn)化效率低下,，價格昂貴的問題,。因此，許多受益的學(xué)者也*改變了他們對電轉(zhuǎn)化儀的認(rèn)識,。