步驟構(gòu)成：
①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,，使之成為單鏈,，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準備;
②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,，溫度降至55℃左右,，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;
③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在酶的作用下，以P為反應(yīng)原料,，靶序列為模板,，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復(fù)制鏈,。
重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板,。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘,， 2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
實驗試劑與器材：
模板DNA,、2.5mmol/L q DNA聚合酶(5U/SSR引物
10 ×buffer,、15mmol/L Mg2+、ddH2O
PCR儀,、移液槍,、PCR板
實驗步驟：
一、實驗器具與材料：
1,、移液槍：1ml,、200μl,、20μl、10μl,、2μl
2,、吸頭：1ml、200μl,、20μl
3,、勻漿管：5ml
4、吸頭臺：放置1ml吸頭的一個,，放置20μl吸頭的一個
5,、EP管：1.5ml、0.2ml,、100μl
6,、試劑瓶：2個60ml的棕色試劑瓶(廣口，帶蓋)
1個125ml的白色試劑瓶(放無水乙醇)
7,、量筒：50ml,、250ml、500ml
8,、容量瓶：250ml,、500ml、1000ml
9,、試管架：5ml、1.5ml,、20μl
10,、鹽水瓶：250ml、500ml各2個備用,，一個裝無水乙醇,，另一個裝DEPC水
11、鋁制飯盒：4個
12,、塑料小飯盒：1個
13,、大瓷缸：2個
14、錫泊紙：一卷
15,、卷紙：2卷
16,、三角燒瓶：帶蓋，稍大
實驗器具的處理與準備：
1,、塑料制品：(包括槍頭,、EP管、勻漿管等)
先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中,，將塑料制品逐個浸泡其中,，其中小槍頭需要吸管打入DEPC水,，過夜，然后高壓,，再烤干備用,，實驗前將槍頭等放入吸頭臺，再高壓一次(EP管)
2,、玻璃制品：泡酸過夜,，沖洗干凈，蒙錫紙烤干備用(DEPC水泡)(洗凈后先泡1‰DEPC過夜,，再烤干)
3,、勻漿器：(包括剪刀、鑷子)先洗凈后,，再高壓(不需要泡DEPC)
試劑配制：
1,、DEPC水：吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1‰DEPC水，放在1000ml容量瓶中靜置4小時備用,。
2,、75%乙醇：用無水乙醇 DEPC水配，然后放-20℃保存(其中DEPC水需先高壓)
3,、異丙醇：放入棕色瓶中
4：放入棕色瓶中
5,、瓊脂糖
