步驟構(gòu)成：
①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后,，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,，使之成為單鏈,，以便它與引物結(jié)合,，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備;
②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右,，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;
③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在酶的作用下,，以P為反應(yīng)原料，靶序列為模板,，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理,，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程,，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板,。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘,， 2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。
實(shí)驗(yàn)試劑與器材：
模板DNA,、2.5mmol/L q DNA聚合酶(5U/SSR引物
10 ×buffer,、15mmol/L Mg2+、ddH2O
PCR儀,、移液槍,、PCR板
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、實(shí)驗(yàn)器具與材料：
1,、移液槍：1ml,、200μl、20μl,、10μl,、2μl
2、吸頭：1ml,、200μl,、20μl
3、勻漿管：5ml
4,、吸頭臺(tái)：放置1ml吸頭的一個(gè),，放置20μl吸頭的一個(gè)
5、EP管：1.5ml,、0.2ml,、100μl
6,、試劑瓶：2個(gè)60ml的棕色試劑瓶(廣口，帶蓋)
1個(gè)125ml的白色試劑瓶(放無(wú)水乙醇)
7,、量筒：50ml,、250ml、500ml
8,、容量瓶：250ml,、500ml、1000ml
9,、試管架：5ml,、1.5ml、20μl
10,、鹽水瓶：250ml,、500ml各2個(gè)備用，一個(gè)裝無(wú)水乙醇,，另一個(gè)裝DEPC水
11,、鋁制飯盒：4個(gè)
12、塑料小飯盒：1個(gè)
13,、大瓷缸：2個(gè)
14,、錫泊紙：一卷
15、卷紙：2卷
16,、三角燒瓶：帶蓋,，稍大
實(shí)驗(yàn)器具的處理與準(zhǔn)備：
1、塑料制品：(包括槍頭,、EP管,、勻漿管等)
先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料制品逐個(gè)浸泡其中,，其中小槍頭需要吸管打入DEPC水,，過(guò)夜，然后高壓,，再烤干備用,，實(shí)驗(yàn)前將槍頭等放入吸頭臺(tái)，再高壓一次(EP管)
2,、玻璃制品：泡酸過(guò)夜,，沖洗干凈，蒙錫紙烤干備用(DEPC水泡)(洗凈后先泡1‰DEPC過(guò)夜,，再烤干)
3,、勻漿器：(包括剪刀、鑷子)先洗凈后，再高壓(不需要泡DEPC)
試劑配制：
1,、DEPC水：吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1‰DEPC水,，放在1000ml容量瓶中靜置4小時(shí)備用。
2,、75%乙醇：用無(wú)水乙醇 DEPC水配,，然后放-20℃保存(其中DEPC水需先高壓)
3、異丙醇：放入棕色瓶中
4：放入棕色瓶中
5,、瓊脂糖
