實時熒光定量PCR儀廣泛應(yīng)用于各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所,、CDC,、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站,、食品企業(yè)及乳品廠等,。實時熒光定量pcr儀由熒光定量系統(tǒng)和計算機(jī)組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光,。與實時設(shè)備相連的計算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示,。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對于循環(huán)數(shù)的圖表,。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正?;幚韥韽浹a(bǔ)背景熒光的差異,。正常化后可以設(shè)定域值水平,,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平,。
實時熒光定量Pcr儀主要工作原理:
標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,,低溫復(fù)性,,適溫延伸的熱循環(huán),并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律,,與模板DNA互補(bǔ)配對的Taqman探針被切斷,,熒光素游離于反應(yīng)體系中,在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,,被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長,通過實時檢測與之對應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號強(qiáng)度,,求得CT值,,同時利用數(shù)個已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對照,即可得出待測標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù),。
工作原理解析圖:
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