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當(dāng)前位置:迪圖(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>選擇凝膠成像系統(tǒng)的四項基本原則
如何從紛繁的市場上選擇到一款好的成像設(shè)備呢,?很多號稱“”的設(shè)備是否真的能夠打滿分呢,?下面的文章就向您介紹選擇成像系統(tǒng)的“四項基本原則”,。有了這些原則,,您在選擇成像儀時自然成竹在胸,無往不勝,。那么,,凝膠成像作為實驗室里較為為常用的儀器之一,成像設(shè)備成為常用的儀器,。擁有一臺好的,、運行穩(wěn)定的設(shè)備是實驗者的心愿。
原則一:“只選對的,,不選貴的”市場上各品牌,、各型號的成像儀林林種種,但是從成像原理上可以分成兩大類,,分別是拍照成像和掃描成像,。拍照成像簡單說就是樣品和相機的相對位置不動,可以進行單次成像或多次成像,;掃描成像則是相機對樣品進行局部成像,,然后通過樣品或相機的移動對整個樣品進行成像。拍照成像目前主要采用CCD相機成像,,由于可以設(shè)置不同的曝光時間,,常被用來進行微弱的化學(xué)發(fā)光及生物發(fā)光的成像。而掃描成像則由于精度高、重復(fù)性好被廣泛用于大型樣品以及多通道成像中,??梢哉f,對于大型樣品或多通道應(yīng)用,,能選擇掃描成像的,,盡量不要選擇拍照成像。原理搞清楚了,,選擇起來就簡單了,。不同的原理導(dǎo)致了不同應(yīng)用的較為佳選擇,所以千萬不要相信什么“王”之類的鬼話,,沒有任何一款機器可以通吃所有應(yīng)用領(lǐng)域,。
下面就實驗室較為常見的一些應(yīng)用簡單的說明選擇的依據(jù):核酸電泳凝膠:一般此類凝膠都采用EB染色、紫外激發(fā),,而且凝膠較小,。推薦采用一般的凝膠成像設(shè)備即可完成。蛋白電泳凝膠:一般此類凝膠采用考染或銀染,,白光透射成像,。對于小型凝膠您可以選擇一般的凝膠成像設(shè)備,但是對于大型凝膠,,特別是雙向電泳凝膠,,由于CCD拍照成像會有幾何扭曲,而且透鏡效應(yīng)也會導(dǎo)致不同區(qū)域的信號強度差異,,另外CCD拍照也無法保證不同凝膠的成像參數(shù)保持一致,,因此掃描成像是選擇。轉(zhuǎn)印膜:這個稍微有些復(fù)雜,。一般轉(zhuǎn)印膜有比色法顯色,、同位素、化學(xué)發(fā)光和熒光等不同檢測手段,。比色法顯色就是產(chǎn)生有顏色的條帶或斑點,,一般采用普通的凝膠成像設(shè)備即可。同位素可以采用壓膠片曝光的方法,,但是費時,、費力而且容易過飽和。比較通用的方法是由FujiFilm在1981年發(fā)明的磷屏成像技術(shù),,獲得信號潛影的磷屏通過激光掃描就可以獲取同位素的信號,。而化學(xué)發(fā)光是目前較為常用的蛋白印跡的檢測手段,無疑,,冷CCD拍照成像對這種微弱的光信號是較為合適的,。熒光是所有這些檢測手段中較為令人贊嘆的和較為有前景的,。這不僅僅是因為熒光染料具有較為寬的動態(tài)范圍,而且還在于它能夠為我們提供多通路的檢測途徑(同樣適用于凝膠),。當(dāng)然,,您可以使用單一熒光檢測,這時您對凝膠成像設(shè)備的要求就包括了新的激光光源和相應(yīng)的濾光片,。
如果您是一個主義者,,或者您需要對鄰近或重疊的目標(biāo)分子進行成像,那么多通道熒光檢測是您的*,。這時掃描成像是較為佳選擇,,這樣選擇不僅僅是因為掃描成像能夠帶來更高的靈敏度和分辨率,更重要的是,,不同通道之間沒有幾何扭曲,,擬合性好。微孔板及其他特殊需求:對于拍照成像而言,,由于幾何扭曲的問題,,對微孔板成像就變得比較復(fù)雜了,一般必須一個的校正裝置才可完成,。當(dāng)然,,如果采用掃描成像一般不需要任何額外附件。很多實驗室現(xiàn)在都對小動物成像非常感興趣,,然而對小動物進行真的不是一件簡單的事,,一方面小動物需要進行麻醉和固定;另一方面還需要對信號位置進行三維定位,。因此,能同時提供功能,、代謝和解剖圖像的PET/CT是進行這類成像的較為有力的工具,。
原則二:實踐是檢驗真理的*標(biāo)準(zhǔn)好用才是硬道理。任憑你說得天花亂墜,,拿來我試試,,不就什么都清楚了。現(xiàn)在多數(shù)廠商都提供Demo機服務(wù),,還有技術(shù)人員現(xiàn)場答疑解惑,,那就請各位上場,,,誰的性能好,,價格優(yōu),那我就要誰的,。當(dāng)然,,我們的實際測試結(jié)果僅僅是針對我們自己的樣品和現(xiàn)場demo的機器而已。我們不能據(jù)此對相關(guān)品牌和相關(guān)型號做太多評判。由于具體應(yīng)用的限制,、操作技巧的差異以及可能的儀器狀態(tài)的區(qū)別,,我們有可能沒有給出公允的評價。但無論如何,,這些訊息對我們采購者和使用者來說都是非常重要的,。
原則三“只比對的,不比費的”我們崇尚實踐,,然而,,現(xiàn)實經(jīng)常不配合我們,或者是沒有Demo機,,或者是有時我們還真的很難根據(jù)實驗結(jié)果分辨出性能上的差異,,這時候第三項原則將至關(guān)重要。當(dāng)我們在考察儀器Demo的情況后還是無法分辨其性能之優(yōu)劣時,,除了可以了解其他人的使用情況和評價,,就只能推開儀器看參數(shù)了。當(dāng)然看參數(shù)是有竅門的,。很多成像儀的參數(shù)寫了幾十條,,其實較為關(guān)鍵的就那么幾條。我們對比不同廠商的參數(shù)時一定要注意只比關(guān)鍵的,,而對那些無關(guān)痛癢的參數(shù)則大可以視而不見,。另外,千萬不要被廠商自己給相應(yīng)產(chǎn)品的評分所欺騙,,他的那套評分系統(tǒng)僅僅是相對自己的產(chǎn)品而言,,即使給出了較為高分“5”分的指標(biāo),和其他廠商產(chǎn)品的性能相比,,可能還是屬于垃圾級的,。對于掃描成像而言,靈敏度一般不是問題,,我們較為關(guān)注的應(yīng)該是分辨率,,當(dāng)然分辨率只要達到我們的要求即可,對于小型的凝膠,、膜和微孔板來說,,一般分辨率在25um左右應(yīng)該是足夠了。在滿足分辨率后,,一個更重要的參數(shù)擺在我們的面前,,那就是動態(tài)范圍,簡單的說,,動態(tài)范圍決定著你能否同時在一張膠上同時看到強的信號和弱的信號,,而且他們之間保持比較好的定量關(guān)系,。一般動態(tài)范圍采用數(shù)量級來表示,這個數(shù)越大,,表明動態(tài)范圍越寬,。對于激光掃描成像系統(tǒng),情況就復(fù)雜一些,。從激光器,、濾光片到分光鏡和檢測器還有好多需要考慮和比較的。下面主要介紹實驗室較為常用的凝聚成像儀的參數(shù)選擇,。根據(jù)原則一,,如果您主要用它來拍普通核酸膠或蛋白膠,那么幾乎市場上所有的成像儀都可以很好的滿足您的需求,,這時除了價格這個決定因素外,,能比較的也就是一些諸如“操作是否簡便、外形是否時尚”等無關(guān)痛癢的指標(biāo)了,。真正需要花心思考察的可能就是準(zhǔn)備做化學(xué)發(fā)光的用戶,,他們對敏感度要求高,同時還要求比較寬的動態(tài)范圍,。要想捕獲到微弱的化學(xué)發(fā)光,,需要上佳的CCD相機和鏡頭。一般來說,,CCD相機的冷卻溫度和背景噪音息息相關(guān),,溫度越低,噪音就越低,。因此,,-25℃的制冷溫度是對相機的*個要求(更低的溫度,噪音降低效果不明顯,,而量子效率又會受很大影響),;另外,較大的像素能夠提供更高的捕光效率,;所以對于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸,。鏡頭的參數(shù)就簡單了,,由于我們只需要觀察近距離的樣品而且一般可以調(diào)整樣品位置(有些廠家甚至提供電動樣品升降平臺),所以基本無需選擇長鏡頭或者變焦鏡頭,;但是,,由于我們需要檢測微弱的化學(xué)發(fā)光,鏡頭的光圈則至關(guān)重要,,一般F值越小,,其通光量越大,,而且成平方反比關(guān)系,因此我們一般需要選擇光圈F值盡量小的鏡頭,。另外,,如果鏡頭是電動的,我們可以省卻打開機箱,,反復(fù)手工調(diào)整光圈和聚焦等的煩惱,。其他我們需要考慮的包括光源、濾光片和暗箱等部件,。光源的種類和發(fā)光的均一度,,濾光片的數(shù)量和暗箱的遮光效果等均在我們的考慮范圍之內(nèi)。當(dāng)然,,一般如果成像儀的CCD和鏡頭配置不錯,,一般這些部件也不會太差。
原則四“附加值很重要”很多用戶認(rèn)為,,買來后擺在實驗室使用的只是一臺儀器而已,。其實,事實遠不是這樣,。買儀器來是為了使用,,而能否用好,除了我們自己的聰明才智和勤學(xué)苦練之外,,廠家的*,。因此,要買就買原廠貨已經(jīng)成為很多用戶的共識,,因為這樣就可以享受到廠家現(xiàn)場和指導(dǎo),。
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