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如何使用電泳槽
夾芯式垂直電泳槽使用方法:
一、組成部件
(一)裝有鉑金絲的貯液槽一對(duì),,配有冷卻裝置及電泳緩沖液流出口。
(二)凹型橡膠框,,配有玻璃板,,可分別制作厚度為lmm、1.5mm的凝膠板,,操作時(shí)根據(jù)需要選擇適當(dāng)厚度的玻璃板及梳子配套使用,。
(三)樣品孔模具(梳子)用于電泳加樣。
(四)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對(duì),,28D,、30型為5對(duì)。
(五)橡膠管五根,。兩根長(zhǎng)的用于連接冷卻水的出入口,;中等長(zhǎng)度的兩根用于連接電極緩;中液的流出口,;較為短的一根用于連接貯液槽間的冷卻水,。
(六)導(dǎo)線1付。二、使用方法
(一)清洗部件
上述部件組裝前要*清洗干凈,。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框,,必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑*清洗干凈。清洗后的玻璃板應(yīng)放在玻璃板支架上晾干水后方能使用,。
(二)組裝電泳槽
A,、1、將四只固定螺桿插進(jìn)一只貯液框(半上槽)的相應(yīng)孔洞中,,然后將貯液框仰放在桌上,。
2、左手拿凹型槽橡膠???,右手的拇指與中指握住玻璃板的兩側(cè)邊緣插到橡膠模框內(nèi) (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板),。
3,、將帶有玻璃的橡膠模框子放在仰放的貯液槽框架上,,其下緣必須對(duì)齊貯液槽框下緣,。
4、雙手拿另一只貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合,,并使橡膠框上的凸出線位于貯液槽有機(jī)玻璃框中央,。
5、裝上四只螺母,,擰緊螺絲,。注意擰緊螺絲時(shí)用力應(yīng)均勻,用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊,。
6,、將電泳槽垂直豎起,,放在桌上,,帶短玻璃板的貯液槽稱(chēng)上槽(陰),帶長(zhǎng)玻璃板的貯液槽稱(chēng)為下槽(陽(yáng)),,在長(zhǎng)玻璃板與橡膠框間有一縫隙,。此縫隙可用已熔化的10%瓊脂沿長(zhǎng)玻璃板下端灌入,為防止留存氣泡,,可稍抬起一端即可趕去氣泡,。待瓊脂*凝固后才能灌膠。
B,、也可將槽垂直豎起,,將帶有玻璃的橡膠模框直接放入槽中,對(duì)稱(chēng)擰緊螺絲后,,用瓊脂封底邊,。
(三)灌膠
1、先灌分離膠,,待凝固后再灌濃縮膠,。灌膠前接通冷卻水,夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管,。
2,、用細(xì)頭滴管吸取膠液,沿長(zhǎng),、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液,。為防止產(chǎn)生氣泡,可稍拾起另一端(氣泡往高處走),,不斷加入膠液,。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處,輕輕加少許水,,雙手輕輕將梳子插入,,待膠凝后就可形成凹形加樣孔。
3,、為防止漏膠,,在上、下貯液槽中立即加入蒸餾水,,但蒸餾水不能*過(guò)短玻璃板上緣,。
4、膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折
射率不同的亮區(qū),。
(四)加樣
1,、松開(kāi)連接上、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子,,放掉槽內(nèi)的蒸餾水,,待水流完后,再夾緊夾子,。
2,、雙手輕輕取出樣品梳子,即可看到界線清楚的加樣孔,,將孔中水分吸去(注意千萬(wàn)不要碰壞孔沿的字面),。
3、在上,、下貯液槽中加入緩,;中液,液體高度應(yīng)*過(guò)上貯液槽短玻璃板上緣。
4,、用微量注射器吸取一定量的樣品加到長(zhǎng),、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(nèi)(注意加樣動(dòng)作要輕,針頭不能碰壞膠面),。
(五)電泳
一貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的負(fù)極相連,,下貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的正極相連。檢查線路無(wú)誤,,方可按照所要求的電壓電流進(jìn)行電泳,。