各類PCR儀的應(yīng)用對比

簡單的說，PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復(fù)制,。

PCR儀的種類有：常規(guī)的普通PCR儀，梯度PCR儀,，原位PCR儀,，實時熒光定量PCR儀四類！

1,、普通PCR儀

一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,，稱之為普通PCR儀，也就是傳統(tǒng)的PCR儀,。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行,。

普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué),、臨床醫(yī)學(xué),、檢驗、檢疫等,。

2,、梯度PCR儀：

一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其較為適合的退火溫度不同,，通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,，從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的較為適合退火溫度進行有效的擴增。

梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,，這樣既節(jié)約時間,，也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研,、教學(xué)機構(gòu)等,。

3、實時熒光定量PCR儀

在普通PCR儀設(shè)計基礎(chǔ)上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),，形成了具有熒光定量PCR功能的儀器,。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同，在PCR擴增時加入的引物是利用同位素,、熒光素等進行標(biāo)記,，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),，得出量化的實時結(jié)果輸出,。

熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分,。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候,，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道,。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達產(chǎn)物,，因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量，需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量,。多通道利于做多重PCR,，實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。

實時熒光定量PCR儀的應(yīng)用：（1）動物疾病檢測：禽流感,、口蹄疫,、豬瘟、沙門菌,、大腸埃希菌,、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等,、炭疽芽孢桿菌,。（2）食品安全：食源微生物、食品過敏源,、轉(zhuǎn)基因,、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。（3）科學(xué)研究：醫(yī)學(xué),、農(nóng)牧,、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究、大學(xué)及研究所等,。

4,、原位PCR儀：

是用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀,。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內(nèi)的作用位置等?？杀３旨毎蚪M織的完整性,，使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細胞中，在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增,。不但可以檢測到靶DNA,，還能標(biāo)出靶序列在細胞內(nèi)的位置。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實用價值,。

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