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當(dāng)前位置:迪圖(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>電泳槽的使用方法及注意事項
所謂電泳,,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,,因此在電場中運動速度不同,,根據(jù)這一特征,應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)進行定性或定量分析,,或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M行組份分析或單個組份提取制備,,這在臨床檢驗或?qū)嶒炑芯恐芯哂袠O其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設(shè)計制造的,。下面簡單介紹其使用方法及注意事項,。
使用方法
1. 首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接,注意極性不要接反,。
2. 電泳儀電源開關(guān)調(diào)至關(guān)的位置,,電壓旋鈕轉(zhuǎn)到較為小,根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍,。
3. 接通電源,,緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達到的所需電壓為止,設(shè)定電泳終止時間,,此時電泳即開始進行,。
4. 工作完畢后,應(yīng)將各旋鈕,、開關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài),,并撥出電泳插頭。
注意事項
1. 電泳儀通電進入工作狀態(tài)后,,禁止人體接觸電極,、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內(nèi)取放東西,,如需要應(yīng)先斷電,,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,,以防漏電,。
2. 儀器通電后,,不要臨時增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,,雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲,,但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。
3. 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同,,電泳時所通過的電流量也不同,其泳動速度及泳至終點所需時間也不同,,故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行,。
4. 在總電流不*過儀器額定電流時(較為大電流范圍),可以多槽關(guān)聯(lián)使用,,但要注意不能*載,,否則容易影響儀器壽命。
5. 某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,,允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機,,但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負載再開機,否則電壓表指針將大幅度跳動,,容易造成不必要的人為機器損壞,。
6. 使用過程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象,,如較大噪音,、放電或異常氣味,須立即切斷電源,,進行檢修,,以免發(fā)生意外事故。
夾芯式垂直電泳槽使用方法:
一,、組成部件
(一)裝有鉑金絲的貯液槽一對,,配有冷卻裝置及電泳緩沖液流出口。
(二)凹型橡膠框,,配有玻璃板,,可分別制作厚度為lmm、1.5mm的凝膠板,,操作時根據(jù)需要選擇適當(dāng)厚度的玻璃板及梳子配套使用,。
(三)樣品孔模具(梳子)用于電泳加樣。
(四)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對,,28D,、30型為5對。
(五)橡膠管五根,。兩根長的用于連接冷卻水的出入口,;中等長度的兩根用于連接電極緩,;中液的流出口;較為短的一根用于連接貯液槽間的冷卻水,。
(六)導(dǎo)線1付,。二、使用方法
(一)清洗部件
上述部件組裝前要*清洗干凈,。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框,,必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑*清洗干凈。清洗后的玻璃板應(yīng)放在玻璃板支架上晾干水后方能使用,。
(二)組裝電泳槽
A,、1、將四只固定螺桿插進一只貯液框(半上槽)的相應(yīng)孔洞中,,然后將貯液框仰放在桌上,。
2、左手拿凹型槽橡膠???,右手的拇指與中指握住玻璃板的兩側(cè)邊緣插到橡膠模框內(nèi) (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板),。
3,、將帶有玻璃的橡膠模框子放在仰放的貯液槽框架上,,其下緣必須對齊貯液槽框下緣,。
4、雙手拿另一只貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合,,并使橡膠框上的凸出線位于貯液槽有機玻璃框中央,。
5、裝上四只螺母,,擰緊螺絲,。注意擰緊螺絲時用力應(yīng)均勻,用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊,。
6,、將電泳槽垂直豎起,放在桌上,,帶短玻璃板的貯液槽稱上槽(陰),,帶長玻璃板的貯液槽稱為下槽(陽),在長玻璃板與橡膠框間有一縫隙,。此縫隙可用已熔化的10%瓊脂沿長玻璃板下端灌入,,為防止留存氣泡,可稍抬起一端即可趕去氣泡,。待瓊脂*凝固后才能灌膠,。
B,、也可將槽垂直豎起,將帶有玻璃的橡膠??蛑苯臃湃氩壑?,對稱擰緊螺絲后,用瓊脂封底邊,。
(三)灌膠
1,、先灌分離膠,待凝固后再灌濃縮膠,。灌膠前接通冷卻水,,夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管。
2,、用細頭滴管吸取膠液,,沿長,、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液,。為防止產(chǎn)生氣泡,可稍拾起另一端(氣泡往高處走),,不斷加入膠液,。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處,輕輕加少許水,,雙手輕輕將梳子插入,,待膠凝后就可形成凹形加樣孔。
3,、為防止漏膠,,在上、下貯液槽中立即加入蒸餾水,,但蒸餾水不能*過短玻璃板上緣,。
4、膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折
射率不同的亮區(qū),。
(四)加樣
1,、松開連接上、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子,,放掉槽內(nèi)的蒸餾水,,待水流完后,再夾緊夾子,。
2,、雙手輕輕取出樣品梳子,即可看到界線清楚的加樣孔,,將孔中水分吸去(注意千萬不要碰壞孔沿的字面),。
3,、在上、下貯液槽中加入緩,;中液,,液體高度應(yīng)*過上貯液槽短玻璃板上緣。
4,、用微量注射器吸取一定量的樣品加到長,、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(nèi)(注意加樣動作要輕,針頭不能碰壞膠面),。
(五)電泳
一貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的負極相連,,下貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的正極相連。檢查線路無誤,,方可按照所要求的電壓電流進行電泳,。
(六)取出膠板
電泳結(jié)束,旋松螺母,,取出膠框,,剝出玻璃板,在兩塊玻璃板下角空隙內(nèi),,用刀片背面輕輕撬動,,即可將膠面與一塊玻璃板分開,將有膠板的玻璃板平放在桌上,,雙手輕輕沿凝膠底將膠片托起,,放在大培養(yǎng)皿中染色,膠板經(jīng)漂洗,、脫色后即可看到清晰的分離條帶
常見問題及解決辦法:1,、紋理和托尾現(xiàn):由于樣品溶解不佳引起的,克服的方法可以在加樣前離心,,增加一些增溶輔助試劑如尿素,。
2、蛋白帶過寬,,與鄰近泳道的蛋白帶相連時由于加樣量太多,,可以減少上樣量。
3,、電泳時間比正常要長,。可能由于凝膠緩沖系統(tǒng)和電極緩沖系統(tǒng)的PH選擇錯誤,,即緩沖系統(tǒng)的PH和被分離物質(zhì)的等電點差別太小,,或緩沖系統(tǒng)的離子強度太高。
4,、指示劑成微笑符號(指示劑前沿呈現(xiàn)向上的曲線形),,說明凝膠的不均勻冷卻,,中間部分冷卻不好,導(dǎo)致分子有不同的遷移率所致,。
5,、指示劑成哭臉符號(指示劑前沿呈現(xiàn)向下的曲線形),由于電泳槽的裝置不合適,,尤其是凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不*,。
6、凝膠時間不對,。通常膠在60min,,1H內(nèi)凝,如果凝的太慢,,可能是TEMEN,,APS劑量不夠或者失效。APS應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用,,TEMED不穩(wěn)定,,容易被氧化成黃色。如果凝的太快,,可能是APS和TEMED用量過多,,此時膠太硬易裂,,電泳時易燒膠,。
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