奧林巴斯顯微鏡照明光路系統(tǒng)調(diào)整方法

實驗過程中為了使奧林巴斯顯微鏡的視野能受到均勻而又充分的照明,，在奧林巴斯顯微鏡初次安裝和調(diào)試時，就必須把照明光路系統(tǒng)調(diào)整好,，這是正確使用奧林巴斯顯微鏡,，并獲得正確結(jié)果的重要手段和較為基本的要求。

奧林巴斯顯微鏡照明光路系統(tǒng)的調(diào)整主要有以下4項內(nèi)容: 

(1) 照明光源燈室在顯微外的初步調(diào)整
　?、?首先將燈室的外殼打開,，壓彈簧夾子將鹵素燈泡裝入插座中，安裝時避免手指直接接觸燈泡(可用柔軟的布或紙隔住),，以免燈泡上留有指紋等臟物,，影響燈泡的使用壽命。
　?、?把燈室擺在桌面上,，接通電源后，用的螺絲刀調(diào)節(jié)燈的調(diào)焦旋鈕孔(標有"←→"),，使燈絲投影在1-2m外的墻上,，將燈絲成像調(diào)至清晰；然后調(diào)節(jié)燈的高低位置調(diào)節(jié)絲孔(標有"──"),，使燈絲位置高低適當,；再調(diào)節(jié)燈的左右位置調(diào)節(jié)螺絲孔(標有"──")，使燈絲左右位置合適,。

(2) 光源發(fā)光體(燈絲)在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的檢驗和校正：
   　目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調(diào)入物鏡的視域范圍內(nèi),，從光源的角度去確保奧林巴斯顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明，這是調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的前提條件,。需要的基本工具:對中望遠鏡購置奧林巴斯顯微鏡時已配備,。
　　① 拔掉燈庫內(nèi)的毛玻璃套筒,，把燈室裝回奧林巴斯顯微鏡上,；
　　② 選用10×物鏡,，開亮光源程序找樣品并調(diào)焦清晰,，再換用40×物鏡把樣品調(diào)焦清 晰(40×物鏡可以看清燈絲的全貌)；
　?、?把聚光鏡的孔徑光闌和視場光闌均開到較為大,；
　　④ 拔掉其中一個目鏡,，換上對中望遠鏡,，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡,，就可在視野中看到燈絲像,；
　　⑤ 如燈絲位置不合適，調(diào)"──"孔,，把燈絲像沿水平方向調(diào)好,，調(diào)"──"孔，把絲像沿垂直方向調(diào)好,，直至將燈絲像調(diào)至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像,；
　　⑥ 調(diào)整完畢后,，將毛玻璃套筒插回原位,，拔掉對中望遠鏡，換回目鏡作下一步調(diào)整,。以上所述照明光源燈室在奧林巴斯顯微鏡外的調(diào)整和光源發(fā)光體在奧林巴斯顯微鏡內(nèi)位置的校驗,，只需在奧林巴斯顯微鏡初次安裝調(diào)試及更換燈泡時進行，平時使用奧林巴斯顯微鏡時不能隨意亂調(diào)亂動,。萬一調(diào)亂時,，可按上述步驟調(diào)回原狀。

(3) 庫勒照明(Kohler)系統(tǒng)的正確調(diào)整：
奧林巴斯顯微鏡的正確調(diào)試,，主要工作之一是照明光路系統(tǒng)的調(diào)整,，而其中的關(guān)鍵是庫勒照明系統(tǒng)的調(diào)整。對于每一位使用奧林巴斯顯微鏡的人員,，特別是作顯微照像的人員來說,，應(yīng)該對庫勒照明系統(tǒng)的原理及其調(diào)整步驟有一定的了解和掌握，才能充分發(fā)揮奧林巴斯顯微鏡應(yīng)有的功能,，拍出來的照片才能在效果上比較一致而又完善,。庫勒照明系統(tǒng)的原理簡單來說就是:光源發(fā)光體上任意一點發(fā)出的光，可以照明奧林巴斯顯微鏡的視域范圍,，而光源發(fā)光體上每一點所發(fā)出的光匯集起來,，在奧林巴斯顯微鏡的視域中就實現(xiàn)了非常充分而又均勻的照明。調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的目的,，是為了使所觀察的視域能獲得均勻而又充分的照明,，防止雜散光對照像系統(tǒng)造成影響或干擾，以免照像時在底片形成灰霧,。高調(diào)整庫勒照明系統(tǒng)的必要部件:視場光闌,、可進行合軸調(diào)整的聚光鏡系統(tǒng)。
　?、?選用10×物鏡和10×目鏡,；
　　② 把聚光鏡前端透鏡擺進光路中,，孔徑光闌調(diào)至適中的位置上(不大不小),，再把聚光鏡升到較為頂?shù)奈恢蒙?，聚光鏡轉(zhuǎn)盤調(diào)至明視野"J"位置；
　?、?把視場光闌調(diào)至較為小(0,。1)；
　?、?載物臺上放上已封片的生物樣品,，開亮光源，調(diào)焦清晰,；
　　⑤ 視域中會出現(xiàn)一個局部照明的區(qū)域或亮斑,，這是視場光闌的模糊像,，在其中可以清晰地看到樣品的細節(jié)；在它之外是較暗的視域,，不一定能把樣品的細節(jié)看得清楚,；
　　⑥ 把聚光鏡微微地向下調(diào),，使視野中的亮斑逐漸收小,，慢慢變成一個清晰的多邊形象，這便是視場光闌的清晰像,；
　?、?一般情況下，多邊形象并不在視域中央,，需要調(diào)整聚光鏡的一對調(diào)中螺絲,，把視場光闌多邊形的像調(diào)至中央位置；
　?、?逐漸開大視場光闌,，使多邊形象成為視域的內(nèi)接多邊形，進一步核對調(diào)中的狀況,，如對中不夠理想,，繼續(xù)微微調(diào)對中螺絲；
　?、?將視場光闌稍為再微微開大一些,，使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上，至此,，庫勒照明系統(tǒng)調(diào)整完畢,。 

(4) 孔徑光闌的正確使用：　
由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響奧林巴斯顯微鏡的分辨率，使用時應(yīng)掌握正確的使用方法,。過去由于對孔徑光闌的認識不足,，往往把它當作是調(diào)節(jié)視野亮度的工具,。雖然調(diào)節(jié)孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度，但會直接影響成像的反差,、對比度及分辨率,，在使用過程中應(yīng)盡可能避免。為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用,，以便在觀察時,，尤其在作顯微照相時獲得較為佳分辨率，在每換用一個倍數(shù)的物鏡時,，在樣品調(diào)焦清晰后,，需要調(diào)節(jié)孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑(物鏡孔徑像)的2/3 ,。調(diào)整方法是用對中望遠鏡對焦于視野中黑色相差環(huán)上,，調(diào)節(jié)孔徑光闌，可以看到一個多邊形的孔徑光闌像,，然后調(diào)到等于物鏡孔徑像的2/3,，即介于黑色相差環(huán)外與圓形視域內(nèi)之間。為方便起見,，可把與各倍數(shù)物鏡相對應(yīng)的孔徑光闌預(yù)先調(diào)整好,，并作好標記，以免每次使用都要重新調(diào)整,。

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