詳細(xì)介紹
【產(chǎn) 品 名 稱】:豬可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體,豬可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2 ELISA試劑盒
【英 文 名 稱】:Porcine soluble vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2/sFLK-1 ELISA KIT
【產(chǎn) 品 包 裝】:96T/48T
【保 存 條 件】:2-8℃
【供應(yīng) 商】:上海恒遠(yuǎn)公司(國內(nèi)供應(yīng)商)
【檢測(cè)標(biāo)本標(biāo)本】:血清或血漿/本產(chǎn)品僅供科研使用
ELISA的樣本收集與前期準(zhǔn)備
利用ELISA進(jìn)行臨床檢驗(yàn)常見的樣本一般包括血液(指血,,靜脈血),尿,,糞便,,腦脊液,胸腹水,,前列腺液,,精液,陰道分泌物等,,這些樣本收集的時(shí)間,、方法和保存都有一定的要求。
(一) 臨床樣本的收集
A,、血液樣本
有些生理因素,,如吸煙、進(jìn)食,、運(yùn)動(dòng),、情緒波動(dòng)、妊娠,、體位等均可影響血液中某些成分的變化,,有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾,,以條件*為宜,,如無法避免,應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素,。
1.外周血
一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血,,該部位應(yīng)無凍瘡,炎癥,,水腫,,破損。如該部位不符合要求,,以其他手指部位代替,。對(duì)燒傷病人,可選擇皮膚完整處采血,。由于部分血液常規(guī)檢測(cè)(如白細(xì)胞計(jì)數(shù),、分類等)受生理因素影響波動(dòng)過大,比較時(shí)宜使條件盡量*,。涉及到體內(nèi)出,、凝血功能的檢測(cè)項(xiàng)目(如血小板計(jì)數(shù),,出血時(shí)間或凝血時(shí)間等)的檢測(cè),一定要注意了解患者是否用過抗凝,、促凝藥物,,以便在減少或避免干擾因素的影響。
2.靜脈血
除涉及各種止血和血栓檢測(cè)等項(xiàng)目需采用抗凝靜脈血血漿外,,目前絕大多數(shù)檢測(cè)項(xiàng)目的分析檢測(cè)可直接采用靜脈血的血清,。在血清檢測(cè)項(xiàng)目中,有些(如血糖,,血脂等)受飲食及晝夜因素影響較大,,一般以清晨空腹血標(biāo)本為宜;有些在血中衰變較快(血清酶活性測(cè)定如ACP活性等),,0~4℃貯存活性減弱也不一,,這些項(xiàng)目的檢測(cè)必須及時(shí)而快速;有些(如肌酸激酶等)受運(yùn)動(dòng)等因素影響較大,。抽血時(shí)避免溶血的發(fā)生也十分重要,,尤其涉及血鉀,LDH等的測(cè)定,。
B,、尿液樣本
同血標(biāo)本一樣,尿液標(biāo)本受飲食,、運(yùn)動(dòng),、藥物量等因素的影響也較大,特別是飲食的影響,,故一般來說晨尿優(yōu)于隨機(jī)尿,。晨尿是指清晨起床后的*次尿標(biāo)本,較濃縮和酸化,,有形成分(如血細(xì)胞,,上皮細(xì)胞,管形)相對(duì)集中便于觀察,。隨機(jī)尿即隨意一次尿,,留取方便,但受飲食,、運(yùn)動(dòng),、藥物影響較甚,易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果,,如飲食性蛋白尿,,飲食性糖尿,維生素C干擾潛血結(jié)果等,。餐后尿(午餐后2小時(shí)收集的患者尿液)適用于尿糖,,尿蛋白和尿膽原的檢查,,此時(shí)的尿標(biāo)本可增加試驗(yàn)敏感性,檢出較輕微的病變,。12小時(shí)尿細(xì)胞計(jì)數(shù)即Addis計(jì)數(shù)(前晚8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液),,因時(shí)間較長,細(xì)菌易繁殖,,須加入防腐劑甲醛。24小時(shí)尿(*天晨8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液)中化學(xué)物質(zhì)的定量,,包括蛋白,,糖,尿17-酮,、17-羥類固醇,,兒茶酚胺,Ca2+等,,檢測(cè)不同的物質(zhì),,選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細(xì)菌培養(yǎng),,要求無菌,,沖洗外陰后留取標(biāo)本。所有尿標(biāo)本的收集都應(yīng)足量,,zui少12 ml,,50 ml,定時(shí)尿須全部收集,,對(duì)女性患者應(yīng)避免陰道分泌物,、經(jīng)血污染尿標(biāo)本。
C,、糞便樣本
糞便標(biāo)本的檢測(cè)對(duì)判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價(jià)值,。采集時(shí)要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便,,對(duì)外觀無異常的糞便須從表面,、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計(jì)數(shù)應(yīng)收集24小時(shí)糞便,。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應(yīng)于排便后立即檢查,,從有膿血和稀軟處取材,保溫送檢,。查日本血吸蟲蟲卵時(shí)應(yīng)取粘液,、膿血部分,孵化毛蚴時(shí)至少留取30g糞便,,且需盡快處理,。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時(shí)或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢,。隱血試驗(yàn)(化學(xué)法),試驗(yàn)前3日禁食肉類及含動(dòng)物血食物并禁服鐵劑,,維生素C等,。所有糞便標(biāo)本采集后1小時(shí)內(nèi)應(yīng)檢查完畢,以防止有形成分受消化酶及pH的破壞,來不及檢測(cè)的,,應(yīng)及時(shí)用PBS進(jìn)行緩沖處理,,離心去上清保存。
D,、腦脊液樣本
腦脊液標(biāo)本采集后立即送檢,,放置過久將影響檢驗(yàn)結(jié)果:如細(xì)胞變性,破壞,,導(dǎo)致計(jì)數(shù)和分類不準(zhǔn),;有些化學(xué)物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少;細(xì)菌發(fā)生自溶影響細(xì)菌的檢出率,。腦脊液抽取后一般分裝三個(gè)無菌管,,*管作細(xì)菌培養(yǎng),第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查,,第三管作一般性狀及顯微鏡檢查,,三管的順序不宜顛倒。因標(biāo)本采集較難,,全部送檢和檢測(cè)過程應(yīng)注意安全,。
E、胸腹水樣本
與腦脊液標(biāo)本一樣,,采集后的標(biāo)本注意安全,,及時(shí)送檢。一般也分裝三管,,一管作常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查,,一管生化檢查,一管細(xì)菌培養(yǎng),,順序以與腦脊液相同為宜,。
F、前列腺液樣本
前列腺液標(biāo)本由前列腺按摩后采集,,液量少時(shí)直接滴在載玻片上及時(shí)送檢,,須注意防止標(biāo)本蒸干,量多時(shí)收集在潔凈干燥的試管中,。若按摩不出前列腺液,,可檢查按摩后的尿液沉渣。
G,、精液樣本
精液標(biāo)本采集前應(yīng)禁欲3~7天,,排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中,,保溫并及時(shí)送檢。由于精子生成日間變動(dòng)較大,,一般應(yīng)檢查2~3次(每次間隔1~2周)方可做診斷,。
H、陰道分泌物樣本
陰道標(biāo)本采集前24小時(shí)應(yīng)禁止房事,、盆浴,、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等,,取材所用器械需清潔,。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材,,制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標(biāo)本,經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標(biāo)本,。
(二) ELISA的樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行
檢測(cè)的樣本,,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,,-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
液體類標(biāo)本: 包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。
1. 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
3. 尿液:
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
6. 組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),,其余冷凍備用,。
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