詳細(xì)介紹
兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3 elisa原理 elisa kit
產(chǎn)品名稱:兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原,,兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3 ELISA試劑盒
英文名稱:Rabbit lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA KIT
試劑盒操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,,均需混勻,,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如樣品濃度過高時,,用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。加樣時,,槍頭應(yīng)直接對準(zhǔn)液面,切勿沿孔壁加樣,。
加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,,注意不要有氣泡,,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘,。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
棄去液體,甩干,,不用洗滌,。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,,在使用前一小時內(nèi)配制),,37℃,60分鐘。
溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板3次,,每次浸泡1-2分鐘,,200μl/每孔,甩干,。
每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液)100μl,,37℃,60分鐘,。
溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,甩干,,洗板5次,,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,,甩干,。
依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),,此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,,后3-4孔顯色不明顯,即可終止),。
依序每孔加終止溶液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測,。
兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3 elisa原理 elisa kit