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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
上海恒遠(yuǎn)生物長(zhǎng)期供應(yīng)高質(zhì)量“兔子內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 ELISA試劑盒",，本產(chǎn)品具有靈敏度高，操作方便,，檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn),，種屬齊全，物美價(jià)廉,，提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),！。
詳細(xì)介紹
兔子內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 elisa原理 elisa kit
產(chǎn)品名稱：兔子內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 ELISA試劑盒
英文名稱：rabbit C-Reactive Protein,CRP ELISA KIT
標(biāo)本的采集及保存
1. 組織勻漿: 將動(dòng)物的組織標(biāo)本先用PBS洗滌,去除多余血液,勻漿化后放在20mlPBS中于-20° C放置過(guò)夜,第二天,經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜,將勻漿物5000x g離心5分鐘,取上清即可檢測(cè),。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,，-20℃不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月,，-80℃不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月；標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),；高血脂的標(biāo)本不需進(jìn)行特殊處理，可直接檢測(cè),。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,，請(qǐng)?zhí)崆芭渲坪盟性噭辉噭┗驑悠废♂寱r(shí),，均需混勻,，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，均應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)允箻悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍,。建議各實(shí)驗(yàn)室在操作前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以建立*稀釋倍數(shù),。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制）,，37℃,60分鐘,。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，350ul/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100ul,，37℃,，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。
6. 依序每孔加底物溶液90ul,，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng),，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液,。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè),。
注：
1. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔（不同于空白孔）,，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4,。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零,。
2. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室 溫,。使用后立即冷藏保存試劑,。
3. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入檢測(cè)溶液B或底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。為防止樣品蒸發(fā),，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板長(zhǎng)時(shí)間處于干燥狀態(tài),。
4. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值。
5. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射,。
6. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,，請(qǐng)于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液,、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，請(qǐng)精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置（如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),，一次不要小于10ul），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,；檢測(cè)液A,、B，以及底物溶液在使用前,，應(yīng)置于37℃溫育30分鐘,；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液,。
7. 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
兔子內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 elisa原理 elisa kit