詳細(xì)介紹
兔子孕激素/孕酮 elisa實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品名稱:兔子孕激素/孕酮ELISA試劑盒
英文名稱:Rabbit Progesterone,PROG ELISA KIT
試劑盒操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,,混勻時(shí)盡量避免起泡,。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,。加樣時(shí),槍頭應(yīng)直接對(duì)準(zhǔn)液面,,切勿沿孔壁加樣,。
加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,,37℃反應(yīng)120分鐘,。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
棄去液體,,甩干,不用洗滌,。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),,37℃,60分鐘,。
溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,,200μl/每孔,,甩干。
每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液)100μl,,37℃,,60分鐘。
溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,,200μl/每孔,,甩干。
依序每孔加底物溶液90μl,,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),,此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔顯色不明顯,,即可終止),。
依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液,。
用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值),。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
兔子孕激素/孕酮 elisa實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)試劑盒