詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:植物維生素B6 ELISA試劑盒
英文名稱:Plant Vitamin B6,VB6 ELISA KIT
Elisa實驗前的準(zhǔn)備
1仔細(xì)閱讀說明書
2確定試劑盒在有效期內(nèi)
3按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量,、體積)
4標(biāo)本制備要規(guī)范,,每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份,。短期內(nèi)無法實驗者,,注意低溫保存
5準(zhǔn)備好所有實驗額外所需物品,如試管,、吸頭,、移液器、離心機(jī)等
6根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
7按說明書將所用試劑平衡至室溫,,配制所需試劑
DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南
8選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進(jìn)行配對,;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體,;從同一家公司選擇抗體對,。
9ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時,應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋,。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作,。
10標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié),。在使用細(xì)胞因子前,,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子,。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),,將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
11一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml,??衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒,、第三類試劑,、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
12為了優(yōu)化靈敏度,,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本,。
13若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
14當(dāng)測定混合液體中的抗原時,,如血清,,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時,。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8. 取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
植物維生素B6 elisa kit elisa法