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產(chǎn)品名稱：植物25羥基維生素D3  ELISA試劑盒

英文名稱：Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA KIT

Elisa實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
　　1仔細(xì)閱讀說明書
　　2確定試劑盒在有效期內(nèi)
　　3按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量,、體積）
　　4標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存）,，盡量分裝做備份,。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,，注意低溫保存
　　5準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管,、吸頭,、移液器,、離心機(jī)等
　　6根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
　　7按說明書將所用試劑平衡至室溫,，配制所需試劑
　　DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南
　　8選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗,，必須識(shí)別不同表位的抗體,；從同一家公司選擇抗體對(duì)。
　　9ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定,。同時(shí),，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作,。
　　10標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,，瞬時(shí)離心試劑瓶,，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶,。
　　11一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程,、放大試劑盒、第三類試劑,、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度,。
　　12為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本,。
　　13若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性,。
　　14當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí),，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.

操作步驟
1．   使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2．   根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
3．   加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
4．   甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5．   每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6．   甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7．   每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8．   取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9．   在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值?！?/span>

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