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產(chǎn)品名稱：大腸桿菌宿主殘留蛋白ELISA試劑盒

英文名稱：Escherichia coli Protein,E.coli P ELISA KIT

Elisa實驗前的準備
　　1仔細閱讀說明書
　　2確定試劑盒在有效期內(nèi)
　　3按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量,、體積）
　　4標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存）,，盡量分裝做備份,。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存
　　5準備好所有實驗額外所需物品,，如試管,、吸頭、移液器,、離心機等
　　6根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量
　　7按說明書將所用試劑平衡至室溫,，配制所需試劑
　　DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南
　　8選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗,，必須識別不同表位的抗體,；從同一家公司選擇抗體對。
　　9ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定,。同時,，應包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作,。
　　10標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,，瞬時離心試劑瓶,，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),，將凍干的細胞因子復溶,。
　　11一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫脴藴实腅LISA操作流程,、放大試劑盒、第三類試劑,、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度,。
　　12為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。
　　13若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性,。
　　14當測定混合液體中的抗原時,，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.

ELISA 試驗時,，注意事項如下：
     1.　正式試驗時,，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份,，以保證實驗結(jié)果的準確性,。有時本底較高，說明有非特異性反應,，可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉。
    2.　在ELISA中,，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括:
    （1）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應,，觀察其顯色反應是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
   （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時,。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1,、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時,，觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
    （3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
    （4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應，而本身無色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應注意防護。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,，應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入　

　大腸桿菌宿主殘留蛋白   elisa kit  elisa法