詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:蘇云金芽孢桿菌蛋白ELISA試劑盒
英文名稱:Bacillus thuringiensis,BT ELISA KIT
Elisa實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
1仔細(xì)閱讀說明書
2確定試劑盒在有效期內(nèi)
3按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量,、體積)
4標(biāo)本制備要規(guī)范,,每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份,。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,,注意低溫保存
5準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,如試管,、吸頭,、移液器、離心機(jī)等
6根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
7按說明書將所用試劑平衡至室溫,,配制所需試劑
DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南
8選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進(jìn)行配對,;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對,。
9ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定,。同時,應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋,。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作,。
10標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié),。在使用細(xì)胞因子前,,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子,。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶,。
11一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml,。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程,、放大試劑盒,、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度,。
12為了優(yōu)化靈敏度,,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
13若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),,應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
14當(dāng)測定混合液體中的抗原時,,如血清,,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果,。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計(jì)算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9. 本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn),。
計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),,OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度,。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:,;2-8℃。
2.有效期:6個月
蘇云金芽孢桿菌蛋白 elisa kit elisa法