詳細(xì)介紹
elisa kit elisa原理 人α半乳糖基抗體試劑盒
產(chǎn)品名稱:人α半乳糖基抗體試劑盒
英文名稱:Human α-galactoyl,Gal ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
檢測范圍:詳見說明書
主要作用:科研
待檢樣本:體液,,血清,,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,,尿液,,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等。
檢測目標(biāo):人,,小鼠,,大鼠,豚鼠,,豬,,犬,兔,,牛,,羊,猴,,兔,,馬等動物種屬。
ELISA所用抗原有三個(gè)來源:天然抗原,、重組抗原和合成多肽抗原,。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等,一般含有多種抗原成分,,需經(jīng)純化,,提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用,因此也稱提純抗原(purifiedantigen),。重組抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均為人工合成品,,使用安全,而且純度高,,干擾物質(zhì)少,。因此雖然制備合成抗原有較高的技術(shù)難度且要求較為昂貴的儀器設(shè)備和試劑,其應(yīng)用仍十分普遍,,特別是對那些天然抗原不易得到的試驗(yàn),,更顯出其獨(dú)到之處。
用于ELISA的抗體有多克隆的和單克隆的,??寡宄煞謴?fù)雜,應(yīng)從中提取IgG才可用于包被固相或酶標(biāo)記,。含單克隆抗體的小鼠腹水中的特異性抗體含量較高,,有時(shí)可適當(dāng)稀釋后直接進(jìn)行包被。制備酶結(jié)合物用的抗體的質(zhì)量往往要求有較高的純度,。經(jīng)硫酸銨鹽析純化的IgG可進(jìn)一步用各種分子篩層析提純,。也可用親和層析法提純特異性IgG,如用酶消化IgG后提取的Fab片段,,則效果更好,。
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3.組織處理:切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用,。
ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法,、雙抗原夾心法,、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競爭等因素的影響,,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制,。
不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量**,,即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,,并保證保存條件,。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性,;對于效期短、使用率低的試劑,,應(yīng)當(dāng)小量分裝,,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效,。
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,,前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體,、異嗜性抗體,、自身抗體、溶菌酶等,,后者包括標(biāo)本溶血,、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長,、標(biāo)本凝固不全,、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
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