詳細(xì)介紹
elisa實(shí)驗(yàn) elisa檢測(cè) 人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素試劑盒
產(chǎn)品名稱:人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素試劑盒
英文名稱:Human matrilysin,MAT ELISA KIT
使用范圍:科研
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、牛、羊…
標(biāo)本齊全:血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營(yíng)品牌:美國(guó)RD
保存條件:2-8℃
有效期:6個(gè)月
運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸,用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸,。
洗滌
洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),,以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái),。可以說(shuō)在ELISA操作中,,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),,應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,,不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,,過(guò)程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,;b.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),;c.浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,,間歇搖動(dòng),,浸泡時(shí)間不可隨意縮短;d.吸干孔內(nèi)液體,。吸干應(yīng)*,,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干,;e.重復(fù)操作c和d,,洗滌3-4次(或按說(shuō)明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,,可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),,也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),,從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,,高于0.2%時(shí),,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水,。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡(jiǎn)便,、快速,。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳,。
Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)規(guī)則:
1,、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過(guò)2%,??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正,。
2,、要配備20ul、50ul,、100ul,、1000ul和排槍各一支,。吸取不同的液體后,要更換槍頭,。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),。
3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4,、實(shí)驗(yàn)時(shí),,要使底物避光保存。
5,、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
6,、吸取液體時(shí),,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差,。
操作程序總結(jié):
1.準(zhǔn)備試劑,,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘
3.洗板5次,,加入酶標(biāo)試劑,,37℃反應(yīng)30分鐘
4.洗板5次,加入顯色液A,、B,,37℃反應(yīng)10分鐘
5.加入終止液
6.15分鐘之內(nèi)度OD值
7.計(jì)算
上海恒遠(yuǎn)生物有限公司大量供應(yīng)ELISA試劑盒(RD ELISA Kit Omega ELISA Kit),抗體(兔單抗,、鼠單抗,、分裝抗體、免疫組化抗體,、二抗,、標(biāo)簽抗體),細(xì)胞(ATCC原代細(xì)胞,、培養(yǎng)基,、正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞),,生化試劑(氨基酸,、緩沖劑、分離試劑,、培養(yǎng)基,、蛋白質(zhì),、酶、生化酶及輔酶,、核酸及其衍生物,、碳水化和物、抗生素,、染色劑,、維生素試劑)。歡迎您,。
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