詳細介紹
ELISA檢測試劑盒?。牛蹋桑樱痢。耍桑?nbsp; 人促腎上腺皮質(zhì)激素試劑盒
產(chǎn)品名稱:人促腎上腺皮質(zhì)激素試劑盒
英文名稱:Human adrencocorticotropic hormone,ACTH ELISA KIT
使用范圍:科研
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠,、豚鼠、兔子,、豬,、犬、牛、羊…
標本齊全:血清,、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液,、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
保存條件:2-8℃
有效期:6個月
運輸條件:低溫運輸,,用干冰或者冰袋低溫運輸,。
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洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗,。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),,應引起操作者的高度重視,,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應液,;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,,即甩去);c.浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,,放置1-2分鐘,間歇搖動,,浸泡時間不可隨意縮短,;d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應*,,可用水泵或真空泵抽吸,,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復操作c和d,,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,,也含親水基團,,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,,并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,,使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度,。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可,。浸泡式猶如盆浴,,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,,且也簡便,、快速。已有實驗表明,,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,,洗滌效果更佳,。
ELISA原理
ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原,、牽9體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù),。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,,每加入一種試劑孵育后,,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應用中,,通過不同的設計,,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a),、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
樣品采集:
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當天進行檢測的標本,,儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶吮?,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,,-20℃可保存1個月,。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶,。
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