詳細(xì)介紹
elisa原理 elisa kit 人甲狀腺結(jié)合球蛋白試劑盒
產(chǎn)品名稱:人甲狀腺結(jié)合球蛋白試劑盒
英文名稱:Human Thyroxine-Binding Globulin Assay,TBG ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測原理: 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
實(shí)驗(yàn)方法:
酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產(chǎn)品用途:科研ELISA檢測試劑盒.本公司可提供實(shí)驗(yàn)代測服務(wù).
服務(wù)承諾:工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo),為客戶提供來樣檢測服務(wù),zui大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性,。
洗滌
洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),,以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,。可以說在ELISA操作中,,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),,應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,,不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),;c.浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,,放置1-2分鐘,間歇搖動(dòng),,浸泡時(shí)間不可隨意縮短,;d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,,可用水泵或真空泵抽吸,,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復(fù)操作c和d,,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),,也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),,從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,,高于0.2%時(shí),,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度,。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,,流水沖洗式則好比淋浴,,其洗滌效果更為*,且也簡便,、快速,。已有實(shí)驗(yàn)表明,,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,,讓水流沖擊板孔表面,,洗滌效果更佳。
競爭法可用于測定抗原,,也可用于測定抗體,。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合,,因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量成反比,。操作步驟如下:
(1)將特異抗體與固相載體連接,,形成固相抗體,。洗滌。
?。?)待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液,,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原,,則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合,。如受檢標(biāo)本中含有抗原,則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合,,競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì),,使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原,,保溫后,,酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)zui充分的量。洗滌,。
?。?)加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原zui多,故顏色zui深,。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,,代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測管顏色越淡,,表示標(biāo)本中抗原含量越多,。
Elisa間接法、競爭法,、捕獲法,,應(yīng)用親和素和生物素的ELISA
親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取,。分子量60kD,,每個(gè)分子由4個(gè)亞基組成,,可以和4個(gè)生物素分子親密結(jié)合。現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素,。生物素又稱維生素H,,分子量244.31,存在于蛋黃中,。用化學(xué)方法制成的衍生物,,生物素-羥基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物,。親和素與生物素的結(jié)合,,雖不屬免疫反應(yīng),但特異性強(qiáng),,親和力大,,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個(gè)親和素分子有4個(gè)生物素分子的結(jié)合位置,,可以連接更多的生物素化的分子,,形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來,,就可大大提高ELISA的敏感度,。
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是一家專業(yè)供應(yīng)生物試劑、elisa試劑盒,、抗體,、標(biāo)準(zhǔn)品的公司,是一家經(jīng)國家相關(guān)部門批準(zhǔn)注冊(cè)的企業(yè),。主要銷售許多較高水平的產(chǎn)品,,包括各種試劑,elisa試劑盒,,氨基酸,、蛋白質(zhì)、碳水化合物,、植物激素,、表面活性劑、緩沖液,、抗生素、維生素和酶類,抗體抗原,,標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品等及應(yīng)用領(lǐng)域等產(chǎn)品,,產(chǎn)品全國地區(qū) ,銷售額逐年穩(wěn)步提高,。擁有雄厚的實(shí)力,、合理的價(jià)格和優(yōu)良的服務(wù),,能夠及時(shí)解決和滿足客戶的各方面的需求,與國內(nèi)多家企業(yè)建立了良好的長期合作關(guān)系,,在市場上樹立了公司的良好信譽(yù)和形象:在廣大用戶的幫助和支持下,,經(jīng)過不懈的努力,已成為國內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的主要公司之一,。
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