詳細(xì)介紹
elisa實驗 elisa原理 人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶試劑盒
產(chǎn)品名稱:人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶試劑盒
英文名稱:Human inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA KIT
種屬:人
使用范圍:科研
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標(biāo)本齊全:血清、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液,、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:RD,、RB,、IBL
保存條件:2-8℃
有效期:6個月
運輸條件:低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸,。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,,發(fā)展十分迅速,,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。
實驗原理
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),,將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,,具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。
操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過一夜,。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,下同),。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置37℃孵育1小時。然后洗滌,。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5~1小時,洗滌,。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+",、“-"號表示,。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性,。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,,4℃過一夜。
2,、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4,、5、6,。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+",、“-"號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主要供應(yīng)進口/國產(chǎn)ELISA試劑盒,、細(xì)胞,、血清、抗體,、金標(biāo)試劑盒,、生物試劑、培養(yǎng)基,、一抗,、二抗等產(chǎn)品,是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)和銷售的綜合性生物科學(xué)公司,產(chǎn)品國內(nèi)大部分地區(qū),。公司專注于高品質(zhì)ELISA試劑盒的整合和研發(fā),,打造國內(nèi),*的ELISA試劑盒,,希望恒遠(yuǎn)公司的ELISA試劑盒能為國家科研做出的貢獻,。
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