詳細介紹
elisa kit elisa法 人天青殺素試劑盒
產(chǎn)品名稱:人天青殺素試劑盒
英文名稱:Human azurocidin,AZU ELISA KIT
種屬:人
使用范圍:科研
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、牛、羊…
標本齊全:血清,、血漿、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿,、組織液、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國RD?。遥隆。桑拢?br />保存條件:2-8℃
有效期:6個月
運輸條件:低溫運輸,,用干冰或者冰袋低溫運輸,。
顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強,。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確,。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控制,,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應(yīng)時間,,及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,,再延長反應(yīng)時間,,可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行,,顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng),。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。 TMB受光照的影響不大,,可在室溫中置于操作臺上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,,宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,,約40分鐘顯色達,,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種,,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,,是目視判斷的良好終止劑,。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值,。
(2) 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗,,需先將板置于標準96孔的座架中,才可進行比色,。在加底物液顯色前,,先將軟板邊緣剪凈,這樣,,此板就可*平妥坐入座架中,。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),,以記錄本次試驗的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,,然后進行計算,。比色結(jié)果的表達以往通用光密度(oplical density,OD),,現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,,A),,兩者含義相同。通常的表示方法是,,將吸收波長寫于A字母的右下角,,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
(3) 酶標比色儀
酶標比色儀簡稱酶標儀,,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同,,各有特制的適用于板,、珠和小試管的設(shè)計。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標儀,。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度,、讀數(shù)的準確性、重復(fù)性,、精確度和可測范圍,、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,,準確性為±1%,,重復(fù)性達0.5%。舉例說,,若某孔測得的A值為1.083,,則該孔相對于空氣的真實A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),,重復(fù)測定數(shù)次,,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同,。普通的酶標儀在0.000~2.000,,新型號的酶標儀上限拓寬達2.900,甚至更高,。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,線性范圍常小于可測范圍,,比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,,而其線性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA中制作標準曲線時應(yīng)予注意,。 酶標儀不應(yīng)安置在陽光或強光照射下,,操作時室溫宜在15~30℃,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,,測讀結(jié)果更穩(wěn)定,。測讀A值時,,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長,。有的酶標儀可用雙波長式測讀,,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),,第二次在不敏感波長(W2),,兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,,630nm為W2,,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。各種酶標儀性能有所不同,,使用中應(yīng)詳細新聞記者說明書。
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),,現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,,認為ELISA法具有靈敏、特異,、簡單,、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,。不僅適用于臨床標本的檢查,,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查,。本法不僅可以用來測定抗體,,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法,。
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