詳細(xì)介紹
elisa實驗 elisa法 人酸性神經(jīng)鞘磷脂酶試劑盒
人酸性神經(jīng)鞘磷脂酶試劑盒
英文名稱:Human acid sphingomyelinase, ASM ELISA KIT
可測種屬:人,、大小鼠、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、猴、馬…
可測標(biāo)本:血清,、血漿,、細(xì)胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液
規(guī)格:96T/48T 中英文雙版說明書 提供代測 科研試劑
經(jīng)營品牌:RD RB IBL
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸,,用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸,。
ELISA試劑盒所需要樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右 (2000-3000轉(zhuǎn)/分)去除顆粒。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清 ,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
間接法是檢測抗體zui常用的方法,其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體,,故稱為間接法,。操作步驟如下:
(1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì),。
?。?)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物,。經(jīng)洗滌后,,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,,在洗滌過程中被洗去,。
?。?)加酶標(biāo)抗抗體:與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合,從而使該抗體問接地標(biāo)記上酶,。洗滌后,,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體,,可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體,。
(4)加底物顯色:顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量,。
本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體,。
Elisa間接法,、競爭法、捕獲法,,捕獲法測IgM抗體
血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在,,后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法,,先將所有血清IgM(包括特異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,,在去除IgG后再測定特異性IgM。操作步驟如下:
?。?)將抗人IgM抗體連接在固相載體上,,形成固相抗人IgM。洗滌,。
?。?)加入稀釋的血清標(biāo)本:保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分,。
?。?)加入特異性抗原試劑:它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌,。
?。?)加入針對特異性的酶標(biāo)抗體:使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。洗滌,。
?。?)加底物顯色:如有顏色顯示,則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存在,,是為陽性反應(yīng),。
elisa實驗 elisa法