詳細介紹
產(chǎn)品名稱:人中性粒細胞彈性蛋白酶試劑盒
英文名稱:Human neutrophil elastase,NE ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
經(jīng)營種類:進口分裝和原裝、國產(chǎn)
主要作用:科研
保存條件:2-8℃
各種種屬:人,,小鼠,,大鼠,豚鼠,,豬,,犬,兔,,牛,,羊,猴,,兔,,馬等動物種屬。
待檢樣本:體液,,血清,,血漿,細胞培養(yǎng)上清液,,尿液,,組織勻漿,心房水標本等等。
試劑的準備:
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑,。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正,。從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
洗滌:
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,,但卻也決定著實驗的成敗,。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),,以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),,應(yīng)引起操作者的高度重視,,操作者應(yīng)嚴格按要求洗滌,不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,,即甩去);c.浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,,放置1-2分鐘,間歇搖動,,浸泡時間不可隨意縮短,;d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,,可用水泵或真空泵抽吸,,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.重復(fù)操作c和d,,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間,。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,,非離子型洗滌劑既含疏水基團,,也含親水基團,,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,,并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度,。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可,。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,,其洗滌效果更為*,,且也簡便、快速,。已有實驗表明,,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,,讓水流沖擊板孔表面,,洗滌效果更佳。
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