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    在試驗中，不同的細(xì)胞采用不同的裂解方法,。如研磨,，細(xì)胞勻漿,，TritonX--100，稀減法等等,。那么,，具體該怎樣選擇細(xì)胞的裂解方法？本節(jié)內(nèi)容主要圍繞組織樣本裂解細(xì)胞的方法做詳細(xì)介紹,。具體操作方法流程如下,，也歡迎廣大新老客戶提供寶貴建議參與我司探討交流。

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片,。

2. 融解RIPA裂解液,，混勻。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的zui終濃度為1mM。

3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。

5. 充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物,。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-kappaB,、p53等時，通常不必進(jìn)行超聲處理,，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子,。