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李工年末分享細(xì)胞因子溶解方法
閱讀：1202 發(fā)布時間：2014-12-4 李工年末分享細(xì)胞因子溶解方法
我們知道,，PeproTech的所有細(xì)胞因子和蛋白均為凍干粉,，這使得運輸非常便捷，只要常溫即可,。而且,，細(xì)胞因子和蛋白凍干粉非常穩(wěn)定，在-20oC或-80oC條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進行溶解,，然后以液體形式加到培養(yǎng)體系或注射入動物體內(nèi)。溶解步驟非常關(guān)鍵,，因溶解不好會導(dǎo)致細(xì)胞因子或蛋白的失活,，這也是很多用戶在實際使用中經(jīng)常遇到的問題。
技術(shù)部李工分享： PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白（Carrier Protein）或其他添加劑（如BSA,、HAS或蔗糖等）,，并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),，形成很薄或不可見的蛋白層,。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開蓋前先離心,，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正?，F(xiàn)象）。
1．離心：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘,。
2．溶解（Reconstitution）：PeproTech細(xì)胞因子用去離子水或其它緩沖液（根據(jù)說明書要求進行選擇）溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的產(chǎn)品，需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解),。溶解時不可振蕩,，避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,，待細(xì)胞因子*溶解后使用,。溶劑的選擇：
1）要求用去離子水溶解的產(chǎn)品，務(wù)必不可用鹽溶液,，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出,；
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品，請依照PeproTech細(xì)胞因子說明書上的濃度,，同樣也是為了避免過高的鹽濃度,。
經(jīng)常有用戶會問，為什么會有這么多種溶解方法,？
答：我們知道,，蛋白的溶解性與很多因素有關(guān)，其中比較重要的是pH值和離子強度,。PeproTech的細(xì)胞因子或重組蛋白在出廠前均經(jīng)嚴(yán)格測試,，說明上所標(biāo)明的溶解液是能夠?qū)⒃摷?xì)胞因子或重組蛋白*溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標(biāo)明的不符,，很多時候會造成細(xì)胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無法溶解,，這樣所配得的細(xì)胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。