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李工年末分享細胞因子溶解方法

閱讀:1157          發(fā)布時間:2014-12-4

                                李工年末分享細胞因子溶解方法
     我們知道,,PeproTech的所有細胞因子和蛋白均為凍干粉,,這使得運輸非常便捷,,只要常溫即可,。而且,,細胞因子和蛋白凍干粉非常穩(wěn)定,,在-20oC或-80oC條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,,然后以液體形式加到培養(yǎng)體系或注射入動物體內(nèi),。溶解步驟非常關(guān)鍵,因溶解不好會導(dǎo)致細胞因子或蛋白的失活,,這也是很多用戶在實際使用中經(jīng)常遇到的問題,。

技術(shù)部李工分享: PeproTech細胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),,并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理,,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層,。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,,務(wù)必在開蓋前先離心,,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象),。 

1.離心:高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。 

2.溶解(Reconstitution):PeproTech細胞因子用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,,如10ug的產(chǎn)品,,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩,,避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,,可加入適當?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,待細胞因子*溶解后使用,。溶劑的選擇: 
      1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,,務(wù)必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出,; 
      2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,,請依照PeproTech細胞因子說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度,。 

 經(jīng)常有用戶會問,,為什么會有這么多種溶解方法?
            答:我們知道,,蛋白的溶解性與很多因素有關(guān),,其中比較重要的是pH值和離子強度。PeproTech的細胞因子或重組蛋白在出廠前均經(jīng)嚴格測試,,說明上所標明的溶解液是能夠?qū)⒃摷毎蜃踊蛑亟M蛋白*溶解的液體,。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符,很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無法溶解,,這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失,。  

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