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酶聯(lián)免疫吸附法中有技術(shù)問答精辟解析
閱讀：1069 發(fā)布時間：2014-11-24上海恒遠生物公司所采用的酶免疫測定（enzyme immunoassay, EIA）或免疫酶技術(shù)（immunoenzymatic technique）是指用酶標記抗體或酶標記抗體進行的抗原抗體反應(yīng)。它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)與酶連接,，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),，用于定量測定,。目前常用的方法稱為酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）,，其方法簡單,，方便訊速,，特異性強,。ELISA是由抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性,，然后加一種抗體（抗原）與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物（標記物）,，此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應(yīng)后，再加上酶的相應(yīng)底物,，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色,。那么酶聯(lián)免疫吸附法中有哪些技術(shù)問答，請點擊恒遠查詢相關(guān)解析：（以下是根據(jù)客戶問題整理精品解答） |
問：人的Quantikine ELISA試劑盒是否有相關(guān)的對照,？ 答：上海恒遠R&D 為人的Quantikine ELISA試劑盒提供三重對照組,。請同我們以便確定產(chǎn)品的目錄號。 問：我想使用你們目錄中的重組蛋白作為我的ELISA的對照,，但我發(fā)現(xiàn)質(zhì)量上有差異,。這是為什么？ 答：首先要考慮的是重組蛋白的質(zhì)量會高出試劑盒的可測試范圍數(shù)倍,，必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測試范圍,。一般來說是從mg/毫升稀釋到pg/毫升，在這中間光是移液管的誤差就達到了可測量的水平,。 其次要考慮的是R&D Elisa試劑盒的免疫測試方法測量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的,、用第二種抗體測定的，這種測定是在試劑盒研發(fā)時與標準蛋白校正過的,。這些經(jīng)過測定的早期標準蛋白成為基本校正物,，后來的標準都同它校正。這樣不同生產(chǎn)批號的免疫測定試劑盒將是一致的,。這些基本校正物蛋白質(zhì)量的測量方法也許與你的試劑管中蛋白質(zhì)量的測定方法有所不同,。 問：什么是競爭性ELISA? 答：競爭ELISA基于競爭結(jié)合技術(shù)，即樣本中的待測分子與固定量的標記的同樣分子（我們一般用堿性磷酸酶作為標記）同時與固定在孔板上的抗體的同一結(jié)合位點進行競爭,，參照標準曲線,，試驗數(shù)據(jù)值是定量的。 問：什么是夾心ELISA,？ 答：夾層ELISA采用對樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體,，然后用第二個帶標記的抗體作檢測，檢測抗體對分析物也是專一的,。當參照標準曲線時,，試驗數(shù)據(jù)值是定量的。 問：什么是直接ELISA,？ 答：直接ELISA是將被測的分析物直接包膜在微孔板表面,，然后用測試抗體來證實被測分析物的存在,。當與重組蛋白（標準曲線）進行參照時,，試驗數(shù)據(jù)值是半定量的。 問：恒遠R&D 品牌的ELISA試劑盒可以做多少個樣本,？ 答：R&D品牌的ELISA試劑盒為48T,，96T的規(guī)格,，分別48T可做6個標準曲線及42個樣本，96T可做12個標準曲線及84個樣本,。 問：Quantikine ELISA試劑盒里都包括什么,？ 答：R&D Systems的Quantikine ELISA試劑盒是一個完整的試劑盒。它包含了一個已包板的微孔板,、酶標抗體,、標準蛋白、稀釋劑,、底物,、終止劑、洗液和微孔板密封膜,。所有試劑盒對實驗說明書中所列樣本都經(jīng)充分驗證,，確保高質(zhì)量。 問：什么是DuoSet,？ 答：DuoSet ELISA開發(fā)系統(tǒng)提供了足夠的捕獲抗體,、測試抗體、標準蛋白和Streptavidin-HRP,，可以做大約十五個96孔微孔板的實驗,。我們還提供了樣本試驗流程和與這一系統(tǒng)配套的試劑。DuoSet ELISA開發(fā)系統(tǒng)主要是為高通量篩選細胞培養(yǎng)的上清液所設(shè)計,，但熟悉ELISA研發(fā)的實驗人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用,。 問：我是否可將標準曲線的兩端延伸？ 答：在任何情況下,，我們都不支持超出確定范圍的實驗結(jié)果,。在我們確定的測試范圍，我們保證實驗結(jié)果的可重復(fù)性,。 問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度,？ 答：靈敏度是統(tǒng)計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的,。靈敏度是將20個零復(fù)制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度,。而zui低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關(guān)的zui低點,，因而是可定量的,。 |