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恒遠(yuǎn)動(dòng)態(tài)之如何消除組織培養(yǎng)的污染?
閱讀:1049 發(fā)布時(shí)間:2014-11-17如何消除組織培養(yǎng)的污染,?這可能是很多客戶在檢驗(yàn)時(shí)所遇到的困難。對(duì)此上海恒遠(yuǎn)生物今日動(dòng)態(tài)分析如何消除組織培養(yǎng)污染,,歡迎大家訂購我司培養(yǎng)基,,細(xì)胞等生化試劑產(chǎn)品,。
根據(jù)技術(shù)解析當(dāng)重要的培養(yǎng)細(xì)胞污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染,。首先,,確定污染物是細(xì)菌、真菌,、支原體或酵母,,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),,檢查HEPA過濾器,。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,因而,,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟,。
1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度,。
2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),,把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中,。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,,0.25,,0.50,1.0,,2.0,,4.0,8.0 mg/ml。
3)每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo),,如脫落,,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓,。
4)確定抗生素毒性水平后,,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代,。
6)重復(fù)步驟4,。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染是否以已被消除。
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