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上海恒遠(yuǎn)吳經(jīng)理與您一起探討ELISA樣本處理方法
閱讀：858 發(fā)布時間：2014-6-26通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,，如血清,、血漿,、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步，下面就由上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司吳簡單為您介紹一下不同類型的樣本的處理方法,。
1,、 血清
血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單,。
用無熱原,、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃放置一晚,，使血清析出,。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大,，能使血清更大程度的析出,。）4℃ 1000×g離心20分鐘,，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份,，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融,。
采血過程中應(yīng)避免溶血,，因為紅細(xì)胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性,。同時也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性,。
2,、 血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,，取上清即血漿,。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
常用的抗凝劑為EDTA,、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,，檢測時還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求,。
3,、 細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min,，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。
4、 細(xì)胞裂解液
1） 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,，用胰酶消化細(xì)胞,，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略,。
2） 收集細(xì)胞懸液,，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基,，用預(yù)冷的PBS潤洗3次,。
3） 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞。通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4） 將樣品放入-20℃或-80℃,，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品,，反復(fù)凍融幾次,，使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,，以達(dá)到裂解的目的,。
5） 4℃ 10000×g 離心10min，除去細(xì)胞碎片,，取上清,，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融,。
5,、組織勻漿液
1） 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì),。
2） 將組織塊稱重,，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小,，便于勻漿得更充分
3） 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿,，勻漿時置于冰上或冰浴中。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿,，例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）
4） 吸取勻漿液到離心管,，4℃ 5000×g 離心5~10min,，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。
6、 尿液,、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,，取上清即可檢測。
總的來說,，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除,。
為了保證檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測,；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測,。
另外,，還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性,，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。