公司動態(tài)
技術(shù)解析腫瘤壞死因子的檢測方法
閱讀:1938 發(fā)布時間:2014-5-15 技術(shù)員根據(jù)腫瘤壞死因子的實驗,,揭示了腫瘤壞死因子(tunlornecrosisfactor,TNF)有α和β兩種類型,,后者亦稱淋巴毒素(lymphotoxin,,LT),雖然產(chǎn)生的細胞類型不盡相同,,但能與相同的受體結(jié)合,,故二者的生物學(xué)活性極其相似;此外,,二者又有膜結(jié)合型與分泌型兩種形式,。
TNF-α與β在體內(nèi)、外均可對一些腫瘤細胞或細胞系起殺傷作用,,而對體外培養(yǎng)的多種正常細胞則無細胞毒效應(yīng),。根據(jù)這一特點,可利用對TNF敏感的靶細胞測定TNF活性,。zui常用的方法是檢測TNF對小鼠成纖維細胞株L929或L-M細胞的細胞毒活性,,細胞死亡率與TNF活性成正比。并可用特異性中和抗體來區(qū)別TNF-α與TNF-β,。檢測細胞毒活性可用51Cr釋放法或染料染色方法,。
利用抗原—抗體反應(yīng)檢測TNF,可采用RIA,、ELISA,、間接免疫熒光法及免疫組化法。RIA及ELISA可用于待檢樣品的定量,,現(xiàn)已有國產(chǎn)的TNF ELISA試劑盒出售,,方法簡便、敏感且特異,。而間接免疫熒光法及免疫組化法可用于對TNF的組織定位或觀察TNF在細胞內(nèi)及胞膜的定位,。
TNF-α分為跨膜型及分泌型,前者分子量為26kD,,而后者則為17kD,。可借助SDS-PAGE電泳,,將蛋白按分子量大小分開,,再用免疫印跡技術(shù)特異性地顯示兩種類型的TNF-a。
根據(jù)技術(shù)員對腫瘤壞死因子的實驗分析,,我們?yōu)槟峁┠[瘤壞死因子試劑盒,,種屬多類,,咨詢?;虻卿浽诰€留言,。