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標(biāo)準(zhǔn)曲線如何繪制？上海恒遠(yuǎn)告訴您。技術(shù)動態(tài)分析，由上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司實驗室技術(shù)部分享,，由于老師們對繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線有一定的異議，我司特別推出技術(shù)指導(dǎo)專題討論會,，對于老師們所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，標(biāo)準(zhǔn)曲線有什么問題作出一一解答。對此技術(shù)總工對以下問題作出詳細(xì)說明：

 上海恒遠(yuǎn)提出做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意

1,、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的,，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結(jié)果無從談起,。

2,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),，包括上 限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

3,、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。

4,、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時,，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響,，提高準(zhǔn)確性,。

5,、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點,，但至少要保證有5個點,。

6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?，但一般來說,，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對于有些實驗,，至少要0.99甚至是 0.999.

上海恒遠(yuǎn)總結(jié)選擇什么方程去擬合

用于免疫檢測的所謂“標(biāo)準(zhǔn)曲線”其實稱為擬合曲線比較合適,。免疫檢測時標(biāo)準(zhǔn)點（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度如果和相應(yīng)的吸光度（OD）值如 果能夠呈現(xiàn)直線關(guān)系當(dāng)然是的了,，這時可以通過EXELL等方便的獲得擬合曲線,，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想 的情況,，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值往往是"S"型的曲線關(guān)系,，這時就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了,。

關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式,，直線、二次曲線,、三次曲線,、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合,，但都只適用于曲線的一部分,， 有的適用于前半段，有的適用于后半段,，有的適用于中間一段,，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的適用性。當(dāng)然,，如果用于定量,，還是在中間一段 較好。這些方法雖然沒有一種方法可以通用,，但也都可以用,。關(guān)鍵在于你的標(biāo)準(zhǔn)曲線做到了S形的哪一部分，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分,。在S曲線的低 濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合,，中低濃度部分可以用直線方程，中間部分可用對數(shù)方程,，而中后段可用四參數(shù),。

目前上zui流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合”,，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較正確的獲 得樣品中待測物質(zhì)的濃度值,。

其實,，在一個長的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想,。但并不是說它就是的,。事實上不僅是ELISA，其它很多生物學(xué)反應(yīng)都是S形 曲線,，也都可以用Logistic曲線擬合,。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事,。如果用來定量,，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩端的 平坦部分計算誤差會大,，有時甚至?xí)艽蟆?/span>

國內(nèi)外的定量試劑盒往往嚴(yán)格規(guī)定了較窄的使用濃度范圍,，實際上是一種偷懶得做法，為了避免叫你選擇不同類型的標(biāo)準(zhǔn)公式,。 

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