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1.免疫脾細(xì)胞的制備 制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系 Balb/c小鼠,。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備,，也可采用脾內(nèi)直接免疫法,。

2.骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選 在融合前，骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過(guò)含8-AG的培養(yǎng)基篩選,，防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）,。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，融合前24h換液一次,，使骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,。

3.細(xì)胞融合的關(guān)鍵:

1）技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如,，供者淋巴細(xì)胞沒(méi)有查到免疫應(yīng)答,。這必然要失敗的。

2）融合試驗(yàn)zui大的失敗原因是污染,，融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)干凈的環(huán)境,，以及適宜的無(wú)菌操作技術(shù),。

3）陽(yáng)性克隆的篩選 應(yīng)盡早進(jìn)行。通常在融合后10天作*次檢測(cè),，過(guò)早容易出現(xiàn)假陽(yáng)性,。檢測(cè)方法應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確,、而且簡(jiǎn)便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì),，以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇,。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等,。其中ELISA法zui簡(jiǎn)便,，RIA法zui準(zhǔn)確。陽(yáng)性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次,，均陽(yáng)性時(shí)才確定為陽(yáng)性克隆進(jìn)行擴(kuò)增,。

4） 克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選,。這是因?yàn)槌跗诘碾s交瘤細(xì)胞是不穩(wěn)定的，有丟失染色體的傾向,。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株,。