化工儀器網(wǎng)
公司動態(tài)
ELISA比色和顯色的方法
閱讀：2186 發(fā)布時間：2012-3-8ELISA比色和顯色的方法
（1） 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗(yàn),，需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中，才可進(jìn)行比色,。在加底物液顯色前,，先將軟板邊緣剪凈，這樣,，此板就可*平妥坐入座架中,。
比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔）,，以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn),，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,，然后進(jìn)行計(jì)算。
比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度（oplical density,，OD）,，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence，A）,，兩者含義相同,。通常的表示方法是，將吸收波長寫于A字母的右下角,，如OPD的吸收波長為492nm,，表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
（2） 顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),，陰性孔可保持無色,，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行,。在定量測定中,，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行,，時間一般不需要嚴(yán)格控制,，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,，再延長反應(yīng)時間,，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上,，邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸減弱,，至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止,。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間（12-24小時）不褪,，是目視判斷的良好終止劑。此外,，各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
（3） 酶標(biāo)比色儀
酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,，通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì),。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板,、珠和小試管的設(shè)計(jì),。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度,、讀數(shù)的準(zhǔn)確性,、重復(fù)性、度和可測范圍,、線性等等,。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001，準(zhǔn)確性為±1%,，重復(fù)性達(dá)0.5%,。舉例說，若某孔測得的A值為1.083，則該孔相對于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01（1.073~1.093）,，重復(fù)測定數(shù)次,，其A值均應(yīng)1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同,。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,，新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，甚至更高,。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示,。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍,，比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,，而其線性范圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意,。
酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,，測讀結(jié)果更穩(wěn)定,。
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司專業(yè)代理美國R&D,、Amresco,、Sigma、Pharmacia,、Abcam等各*高質(zhì)量試劑盒和生物科研試劑,，產(chǎn)品涵蓋ELISA試劑盒、生物試劑,、抗體,、對照品、血清,、細(xì)胞,、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)耗材等,，公司產(chǎn)品幾乎涉及所有領(lǐng)域,，代表了zui高品質(zhì)。
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是一家生物技術(shù)企業(yè),，主要從事免疫學(xué),、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售,。公司專業(yè)代理美國R&D,、Amresco、Sigma、Pharmacia,、Abcam等各*高質(zhì)量試劑盒和生物科研試劑,，產(chǎn)品涵蓋ELISA試劑盒、生物試劑,、抗體,、對照品、血清,、細(xì)胞,、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)耗材等,，公司產(chǎn)品幾乎涉及所有領(lǐng)域,，代表了zui高品質(zhì)。
上海恒遠(yuǎn)生物先后與河南中醫(yī)學(xué)院,、復(fù)旦大學(xué),、同濟(jì)大學(xué)、上海交通大學(xué),、華東師范大學(xué),、第二軍醫(yī)大學(xué)、仁濟(jì)醫(yī)院,、曙光醫(yī)院,、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院,、上海有機(jī)研究所,、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。公司致力于為廣大高校,、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) ,、細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。
主要代理產(chǎn)品：
試劑盒：ELISA試劑盒,、檢測試劑盒,、免疫組化試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒,、金標(biāo)檢測試劑盒,、細(xì)胞凋亡試劑盒、生化試劑盒等,。
生物試劑：生化試劑,、科研試劑,、化工原料、化學(xué)試劑,。
血清：內(nèi)皮細(xì)胞血清,、進(jìn)口血清、GIBCO胎牛血清等,。
抗體：進(jìn)口原裝抗體,、進(jìn)口分裝抗體、單克隆抗體,、多克隆抗體,、單標(biāo)抗體、雙標(biāo)抗體,、多標(biāo)抗體,、一抗、二抗,；免疫組化抗體,、免疫熒光抗體、流式細(xì)胞抗體,、免疫細(xì)胞化學(xué)抗體等,。
細(xì)胞：*細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞,、正常細(xì)胞,、腫瘤耐藥細(xì)胞等。
標(biāo)準(zhǔn)品：進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品,、中檢所標(biāo)準(zhǔn)品,。
培養(yǎng)基：顯色培養(yǎng)基、大腸桿菌培養(yǎng)基,、干燥培養(yǎng)基、其它菌檢測培養(yǎng)基等等,。
：