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上海恒遠(yuǎn)與您嘮嘮關(guān)于抗體特異性的選擇
閱讀:1122 發(fā)布時(shí)間:2018-3-22 陽春三月,,上海恒遠(yuǎn)與您嘮嘮關(guān)于抗體特異性的選擇,。特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面:蛋白特異性,、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性,、標(biāo)記物的特異性。
1,、蛋白特異性:
針對需要檢測的蛋白查找抗體,,幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分,重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測,,對抗體的要求是不一樣的,,注意查看抗體說明書的檢測說明。如果重組蛋白不 是全長表達(dá),,則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi),。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與修飾的方式,特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對,,并結(jié)合抗體免 疫原序列,,查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點(diǎn),,不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在,,不宜一概而論。
2,、種屬特異性:
同種蛋白不同物種,,有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的,,根據(jù)蛋白的同源情況與其他種屬發(fā)生交叉 反應(yīng),。需要參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體,,可以通過蛋白的序列比對,,選擇同源序列免疫的抗體,不過一般這種情況生產(chǎn)商不會受 理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,,如果可以申請到免費(fèi)的抗體樣品,,則利于抗體選擇。
3,、實(shí)驗(yàn)方法特異性:
目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多,,不同的使用方法過程中,,因?yàn)閷Φ鞍讟悠返奶幚矸绞讲灰粯樱鞍椎暮坑胁町?,對抗體的識別表位和效價(jià)要求都是不一樣的,。具體 的根據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會將每個(gè)抗體都進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的檢測,,目前檢測比較多的只是WB,、IHC、IF等,,如果針對具體 的實(shí)驗(yàn)方法沒有找到合適的抗體的,,可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息,選擇盡可能有效果的抗體,。同樣,,申請到免費(fèi)的抗體樣品是個(gè)很好的途徑。
4,、標(biāo)記物的特異性:
一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會使用帶有標(biāo)記的一抗,,比如WB、IHC等,,都是通過二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的,。
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