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大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2試劑盒說明書
閱讀：917 發(fā)布時間：2012-12-10大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2試劑盒檢測原理：
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGF-β2）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGF-β2）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計算樣本中大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGF-β2）含量。
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2試劑盒操作步驟：
1,、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,，固定于框架上,，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加。
4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。
6,、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,，空白對照孔不加。
7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）,。
9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min。
10,、終止：取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11,、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。
12、計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2試劑盒注意事項：
1,、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值，以減小實驗誤差,。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為5-160pg/mL，超過此范圍,，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計算所得,，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（5-160pg/mL范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6,、若顯色過淺,，可適當(dāng)延長底物溫育時間。
7,、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜。
8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用。
9,、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。